中华心血管病杂志
中華心血管病雜誌
중화심혈관병잡지
Chinese Journal of Cardiology
2007年
11期
1000-1004
,共5页
吴恒芳%陈相健%杨笛%卞智萍%徐晋妸%张寄南
吳恆芳%陳相健%楊笛%卞智萍%徐晉妸%張寄南
오항방%진상건%양적%변지평%서진아%장기남
心肌病,肥厚性%肌钙蛋白Ⅰ%突变%腺病毒科%L型钙通道
心肌病,肥厚性%肌鈣蛋白Ⅰ%突變%腺病毒科%L型鈣通道
심기병,비후성%기개단백Ⅰ%돌변%선병독과%L형개통도
目的 探讨国人新的致肥厚型心肌病(HCM)心肌肌钙蛋白Ⅰ基因突变(cTnⅠ R145W)引起HCM发病的可能机制.方法 采用定点突变技术在大鼠cTnⅠ cDNA引入R146W(相当于人R145W)突变,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)做报告基因,构建含野生型和突变型大鼠cTnⅠ cDNA的重组腺病毒载体.Langendoff逆流灌注系统分离成年大鼠心肌细胞,无血清法培养后重组腺病毒转染.Western blot检测重组蛋白的表达,全膜片钳技术记录心肌细胞膜L型钙电流,Fura-2/AM孵育后测定细胞内游离钙离子浓度和咖啡因诱导的肌浆网钙释放.结果 DNA测序证实R146W突变成功引入大鼠cTnⅠ cDNA.新鲜分离的成年大鼠心肌细胞存活率达70%～80%,无血清培养7天后绝大部分能保持长杆状形态.重组腺病毒转染48 h后荧光显微镜下可观察到绿色荧光,cTnⅠ和绿色荧光蛋白单抗均能检测到重组蛋白.与野生型cTnⅠ和正常对照组比较,突变型cTnⅠ组心肌细胞膜L型钙电流峰值明显降低.Fura-2/AM法测定细胞内游离钙离子浓度和咖啡因诱导的肌浆网钙释放,三组之间差异无统计学意义.结论 含R146W突变的cTnⅠ蛋白可能引起心肌细胞的电生理学重构,进一步研究可探讨肌丝对钙的敏感性及钙调节蛋白表达的改变.
目的 探討國人新的緻肥厚型心肌病(HCM)心肌肌鈣蛋白Ⅰ基因突變(cTnⅠ R145W)引起HCM髮病的可能機製.方法 採用定點突變技術在大鼠cTnⅠ cDNA引入R146W(相噹于人R145W)突變,增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)做報告基因,構建含野生型和突變型大鼠cTnⅠ cDNA的重組腺病毒載體.Langendoff逆流灌註繫統分離成年大鼠心肌細胞,無血清法培養後重組腺病毒轉染.Western blot檢測重組蛋白的錶達,全膜片鉗技術記錄心肌細胞膜L型鈣電流,Fura-2/AM孵育後測定細胞內遊離鈣離子濃度和咖啡因誘導的肌漿網鈣釋放.結果 DNA測序證實R146W突變成功引入大鼠cTnⅠ cDNA.新鮮分離的成年大鼠心肌細胞存活率達70%～80%,無血清培養7天後絕大部分能保持長桿狀形態.重組腺病毒轉染48 h後熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光,cTnⅠ和綠色熒光蛋白單抗均能檢測到重組蛋白.與野生型cTnⅠ和正常對照組比較,突變型cTnⅠ組心肌細胞膜L型鈣電流峰值明顯降低.Fura-2/AM法測定細胞內遊離鈣離子濃度和咖啡因誘導的肌漿網鈣釋放,三組之間差異無統計學意義.結論 含R146W突變的cTnⅠ蛋白可能引起心肌細胞的電生理學重構,進一步研究可探討肌絲對鈣的敏感性及鈣調節蛋白錶達的改變.
목적 탐토국인신적치비후형심기병(HCM)심기기개단백Ⅰ기인돌변(cTnⅠ R145W)인기HCM발병적가능궤제.방법 채용정점돌변기술재대서cTnⅠ cDNA인입R146W(상당우인R145W)돌변,증강형록색형광단백(EGFP)주보고기인,구건함야생형화돌변형대서cTnⅠ cDNA적중조선병독재체.Langendoff역류관주계통분리성년대서심기세포,무혈청법배양후중조선병독전염.Western blot검측중조단백적표체,전막편겸기술기록심기세포막L형개전류,Fura-2/AM부육후측정세포내유리개리자농도화가배인유도적기장망개석방.결과 DNA측서증실R146W돌변성공인입대서cTnⅠ cDNA.신선분리적성년대서심기세포존활솔체70%～80%,무혈청배양7천후절대부분능보지장간상형태.중조선병독전염48 h후형광현미경하가관찰도록색형광,cTnⅠ화록색형광단백단항균능검측도중조단백.여야생형cTnⅠ화정상대조조비교,돌변형cTnⅠ조심기세포막L형개전류봉치명현강저.Fura-2/AM법측정세포내유리개리자농도화가배인유도적기장망개석방,삼조지간차이무통계학의의.결론 함R146W돌변적cTnⅠ단백가능인기심기세포적전생이학중구,진일보연구가탐토기사대개적민감성급개조절단백표체적개변.
