四川大学学报(自然科学版)
四川大學學報(自然科學版)
사천대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY
2003年
5期
939-944
,共6页
秦岭%刘克武%莫宏春%江琰%国锦林%刘祝君%喻东
秦嶺%劉剋武%莫宏春%江琰%國錦林%劉祝君%喻東
진령%류극무%막굉춘%강염%국금림%류축군%유동
枯草芽孢杆菌%6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶%分离纯化%性质
枯草芽孢桿菌%6-燐痠葡萄糖痠脫氫酶%分離純化%性質
고초아포간균%6-린산포도당산탈경매%분리순화%성질
采用DEAE-Sepharose离子交换层析,Blue-Sepharose CL-6B特异结合层析和Sephadex G -200凝胶过滤技术,对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化.纯化倍数为112.3倍,比活为1.46 U/mg,回收率为8.2%.纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带.测得全酶相对分子质量为107kD,具有两个分子量相同的亚基,亚基相对分子质量为51kD.最适pH值为8.0,最适温度为30℃,对热不稳定.以6-磷酸葡萄糖酸和NADP+为底物,其Km值分别为Km1(NADP+)=19.8μmol/L和K m2(6-GPA)=22.6 μmol/L.在5 mmol/L～50 mmol/L浓度范围内,Mg2+,Ca2+和Mn2+对酶有激活作用,Fe3+和Cu2+对酶有抑制作用,K+,Na+,Cl-,NO-3,SO-4对酶几乎没有影响.用PMSF,TNBS,NBS,DTT和BrAc对酶进行修饰,实验结果表明,丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团.
採用DEAE-Sepharose離子交換層析,Blue-Sepharose CL-6B特異結閤層析和Sephadex G -200凝膠過濾技術,對枯草芽孢桿菌中的6-燐痠葡萄糖痠脫氫酶進行瞭分離純化.純化倍數為112.3倍,比活為1.46 U/mg,迴收率為8.2%.純化酶液經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢驗為單一帶.測得全酶相對分子質量為107kD,具有兩箇分子量相同的亞基,亞基相對分子質量為51kD.最適pH值為8.0,最適溫度為30℃,對熱不穩定.以6-燐痠葡萄糖痠和NADP+為底物,其Km值分彆為Km1(NADP+)=19.8μmol/L和K m2(6-GPA)=22.6 μmol/L.在5 mmol/L～50 mmol/L濃度範圍內,Mg2+,Ca2+和Mn2+對酶有激活作用,Fe3+和Cu2+對酶有抑製作用,K+,Na+,Cl-,NO-3,SO-4對酶幾乎沒有影響.用PMSF,TNBS,NBS,DTT和BrAc對酶進行脩飾,實驗結果錶明,絲氨痠、囌氨痠、賴氨痠和組氨痠殘基可能是該酶活性中心的功能基糰.
채용DEAE-Sepharose리자교환층석,Blue-Sepharose CL-6B특이결합층석화Sephadex G -200응효과려기술,대고초아포간균중적6-린산포도당산탈경매진행료분리순화.순화배수위112.3배,비활위1.46 U/mg,회수솔위8.2%.순화매액경취병희선알응효전영검험위단일대.측득전매상대분자질량위107kD,구유량개분자량상동적아기,아기상대분자질량위51kD.최괄pH치위8.0,최괄온도위30℃,대열불은정.이6-린산포도당산화NADP+위저물,기Km치분별위Km1(NADP+)=19.8μmol/L화K m2(6-GPA)=22.6 μmol/L.재5 mmol/L～50 mmol/L농도범위내,Mg2+,Ca2+화Mn2+대매유격활작용,Fe3+화Cu2+대매유억제작용,K+,Na+,Cl-,NO-3,SO-4대매궤호몰유영향.용PMSF,TNBS,NBS,DTT화BrAc대매진행수식,실험결과표명,사안산、소안산、뢰안산화조안산잔기가능시해매활성중심적공능기단.
