中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
1期
11-14
,共4页
魏骏飞%徐昭%李力%王志锐%杨东靖%陈锦英
魏駿飛%徐昭%李力%王誌銳%楊東靖%陳錦英
위준비%서소%리력%왕지예%양동정%진금영
汉坦病毒%S基因%毕赤酵母
漢坦病毒%S基因%畢赤酵母
한탄병독%S기인%필적효모
目的构建汉坦病毒HTN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统.方法应用RT-PCR法扩增汉坦病毒Z10株和L99株编码核蛋白的S基因,将扩增产物分别与pGEM-T-Easy载体连接,经序列分析后双酶切,分别定向克隆入载体pPICZαΑ和pPICZαC,继而将重组质粒以SacⅠ线性化并电转化入毕赤酵母X33感受态细胞,用Zeocin筛选高拷贝转化子进行鉴定.结果 PCR扩增产物约为1290bp,与T载体相连测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性分别为99.84%和99.92%,其编码蛋白质二级结构均无改变.定向克隆获得pPICZαΑ-Z10S和pPICZα-L99S,分别电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株PpX33-Z10S和PpX33-L99S,提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符.结论成功构建汉坦病毒HIN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统,为进一步研究奠定基础.
目的構建漢坦病毒HTN型和SEO型S基因畢赤酵母錶達繫統.方法應用RT-PCR法擴增漢坦病毒Z10株和L99株編碼覈蛋白的S基因,將擴增產物分彆與pGEM-T-Easy載體連接,經序列分析後雙酶切,分彆定嚮剋隆入載體pPICZαΑ和pPICZαC,繼而將重組質粒以SacⅠ線性化併電轉化入畢赤酵母X33感受態細胞,用Zeocin篩選高拷貝轉化子進行鑒定.結果 PCR擴增產物約為1290bp,與T載體相連測序結果與Genbank相應序列比較,覈苷痠序列同源性分彆為99.84%和99.92%,其編碼蛋白質二級結構均無改變.定嚮剋隆穫得pPICZαΑ-Z10S和pPICZα-L99S,分彆電轉化得到巴氏畢赤酵母重組菌株PpX33-Z10S和PpX33-L99S,提取其基因組DNA經PCR鑒定與預期相符.結論成功構建漢坦病毒HIN型和SEO型S基因畢赤酵母錶達繫統,為進一步研究奠定基礎.
목적구건한탄병독HTN형화SEO형S기인필적효모표체계통.방법응용RT-PCR법확증한탄병독Z10주화L99주편마핵단백적S기인,장확증산물분별여pGEM-T-Easy재체련접,경서렬분석후쌍매절,분별정향극륭입재체pPICZαΑ화pPICZαC,계이장중조질립이SacⅠ선성화병전전화입필적효모X33감수태세포,용Zeocin사선고고패전화자진행감정.결과 PCR확증산물약위1290bp,여T재체상련측서결과여Genbank상응서렬비교,핵감산서렬동원성분별위99.84%화99.92%,기편마단백질이급결구균무개변.정향극륭획득pPICZαΑ-Z10S화pPICZα-L99S,분별전전화득도파씨필적효모중조균주PpX33-Z10S화PpX33-L99S,제취기기인조DNA경PCR감정여예기상부.결론성공구건한탄병독HIN형화SEO형S기인필적효모표체계통,위진일보연구전정기출.
