生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
38-40
,共3页
冉贵萍%黄海%刘杨%谭杰峰
冉貴萍%黃海%劉楊%譚傑峰
염귀평%황해%류양%담걸봉
吴茱萸%基因组DNA%提取%改良CTAB法%PCR扩增
吳茱萸%基因組DNA%提取%改良CTAB法%PCR擴增
오수유%기인조DNA%제취%개량CTAB법%PCR확증
目的:研究吴茱萸叶基因组DNA的提取方法,以用于扩增片段长度多态性(AFLP)分析.方法:设计了一种改良CTAB法:以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP结合酚形成络合物,然后用缓冲液除去;抽提中加入Vc.将改良CTAB法所提吴茱萸叶DNA与传统的SDS法、CTAB法所提DNA进行比较.利用植物的核糖体DNA(rDNA)保守序列设计引物行PCR扩增鉴定吴茱萸DNA及其质量.并确定提取方法中最佳样本含量和β-巯基乙醇浓度.结果:改良CTAB法提取石虎、疏毛吴茱萸总DNA呈白色,A260/A280为1.721～1.886,DNA分子完整,约20kb左右,PCR扩增条带清晰、明亮,无杂带和脱尾.并确定0.10g为最佳样本量,2.0%为最佳β-ME浓度.结论:石英砂研磨简便、迅速、均匀,该实验所建立的改良CTAB法可有效避免次生代谢物的氧化褐变,是一种小量、快速提取吴茱萸叶DNA优化方法.
目的:研究吳茱萸葉基因組DNA的提取方法,以用于擴增片段長度多態性(AFLP)分析.方法:設計瞭一種改良CTAB法:以石英砂代替液氮研磨;抽提前用不溶性PVP結閤酚形成絡閤物,然後用緩遲液除去;抽提中加入Vc.將改良CTAB法所提吳茱萸葉DNA與傳統的SDS法、CTAB法所提DNA進行比較.利用植物的覈糖體DNA(rDNA)保守序列設計引物行PCR擴增鑒定吳茱萸DNA及其質量.併確定提取方法中最佳樣本含量和β-巰基乙醇濃度.結果:改良CTAB法提取石虎、疏毛吳茱萸總DNA呈白色,A260/A280為1.721～1.886,DNA分子完整,約20kb左右,PCR擴增條帶清晰、明亮,無雜帶和脫尾.併確定0.10g為最佳樣本量,2.0%為最佳β-ME濃度.結論:石英砂研磨簡便、迅速、均勻,該實驗所建立的改良CTAB法可有效避免次生代謝物的氧化褐變,是一種小量、快速提取吳茱萸葉DNA優化方法.
목적:연구오수유협기인조DNA적제취방법,이용우확증편단장도다태성(AFLP)분석.방법:설계료일충개량CTAB법:이석영사대체액담연마;추제전용불용성PVP결합분형성락합물,연후용완충액제거;추제중가입Vc.장개량CTAB법소제오수유협DNA여전통적SDS법、CTAB법소제DNA진행비교.이용식물적핵당체DNA(rDNA)보수서렬설계인물행PCR확증감정오수유DNA급기질량.병학정제취방법중최가양본함량화β-구기을순농도.결과:개량CTAB법제취석호、소모오수유총DNA정백색,A260/A280위1.721～1.886,DNA분자완정,약20kb좌우,PCR확증조대청석、명량,무잡대화탈미.병학정0.10g위최가양본량,2.0%위최가β-ME농도.결론:석영사연마간편、신속、균균,해실험소건립적개량CTAB법가유효피면차생대사물적양화갈변,시일충소량、쾌속제취오수유협DNA우화방법.
