细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
7期
577-580
,共4页
李慧瑾%张伟锋%王东阳%李荣华%齐宗利%赵俊丽%夏海滨
李慧瑾%張偉鋒%王東暘%李榮華%齊宗利%趙俊麗%夏海濱
리혜근%장위봉%왕동양%리영화%제종리%조준려%하해빈
endostatin%K5%腺病毒载体%MTT检测%肿瘤
endostatin%K5%腺病毒載體%MTT檢測%腫瘤
endostatin%K5%선병독재체%MTT검측%종류
目的:人endostatin、 K5及endostatin-K5基因克隆, 重组腺病毒载体的构建及其表达产物体外活性检测.方法:采用PCR方法扩增基因, 通过酶切连接方法将3种基因片段克隆到腺病毒shuttle载体pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用磷酸钙沉淀法分别将经Pac I酶切的表达人endostatin、 K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle载体与Pac I酶切的腺病毒骨架共转染HEK 293细胞;用CsCl密度梯度离心法纯化制备病毒;用重组腺病毒感染HeLa细胞并在不同时间点收获蛋白, Western blot检测24 h、 48 h和72 h的蛋白表达量;通过MTT方法检测蛋白对ECV-304生长抑制作用.结果:成功制备表达人endostatin、 K5及endostatin-K5重组腺病毒载体;Western blot可以检测到蛋白表达, 蛋白表达量随病毒感染HeLa细胞的时间延长而逐渐增高;由重组腺病毒所表达的3种蛋白对ECV304细胞均有明显的生长抑制作用.结论:由含有人endostatin、 K5及endostatin-K5基因的重组腺病毒载体所表达的蛋白对ECV-304生长具有明显的抑制作用.
目的:人endostatin、 K5及endostatin-K5基因剋隆, 重組腺病毒載體的構建及其錶達產物體外活性檢測.方法:採用PCR方法擴增基因, 通過酶切連接方法將3種基因片段剋隆到腺病毒shuttle載體pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His中;用燐痠鈣沉澱法分彆將經Pac I酶切的錶達人endostatin、 K5及endostatin-K5的腺病毒shuttle載體與Pac I酶切的腺病毒骨架共轉染HEK 293細胞;用CsCl密度梯度離心法純化製備病毒;用重組腺病毒感染HeLa細胞併在不同時間點收穫蛋白, Western blot檢測24 h、 48 h和72 h的蛋白錶達量;通過MTT方法檢測蛋白對ECV-304生長抑製作用.結果:成功製備錶達人endostatin、 K5及endostatin-K5重組腺病毒載體;Western blot可以檢測到蛋白錶達, 蛋白錶達量隨病毒感染HeLa細胞的時間延長而逐漸增高;由重組腺病毒所錶達的3種蛋白對ECV304細胞均有明顯的生長抑製作用.結論:由含有人endostatin、 K5及endostatin-K5基因的重組腺病毒載體所錶達的蛋白對ECV-304生長具有明顯的抑製作用.
목적:인endostatin、 K5급endostatin-K5기인극륭, 중조선병독재체적구건급기표체산물체외활성검측.방법:채용PCR방법확증기인, 통과매절련접방법장3충기인편단극륭도선병독shuttle재체pAd5-CMV-H1H2-MCS-6His중;용린산개침정법분별장경Pac I매절적표체인endostatin、 K5급endostatin-K5적선병독shuttle재체여Pac I매절적선병독골가공전염HEK 293세포;용CsCl밀도제도리심법순화제비병독;용중조선병독감염HeLa세포병재불동시간점수획단백, Western blot검측24 h、 48 h화72 h적단백표체량;통과MTT방법검측단백대ECV-304생장억제작용.결과:성공제비표체인endostatin、 K5급endostatin-K5중조선병독재체;Western blot가이검측도단백표체, 단백표체량수병독감염HeLa세포적시간연장이축점증고;유중조선병독소표체적3충단백대ECV304세포균유명현적생장억제작용.결론:유함유인endostatin、 K5급endostatin-K5기인적중조선병독재체소표체적단백대ECV-304생장구유명현적억제작용.
