畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
8期
1145-1149
,共5页
杨明凡%陈红英%张素梅%王彦彬%崔保安
楊明凡%陳紅英%張素梅%王彥彬%崔保安
양명범%진홍영%장소매%왕언빈%최보안
猪肿瘤坏死因子%基因克隆%原核表达%生物学活性
豬腫瘤壞死因子%基因剋隆%原覈錶達%生物學活性
저종류배사인자%기인극륭%원핵표체%생물학활성
本研究旨在克隆和表达猪肿瘤坏死因子成熟肽基因及其表达蛋白的生物活性.根据GenBank登录的猪肿瘤坏死因子α(TNF-α)成熟肽基因序列设计一对上下游引物.应用RT-PCR技术直接从丹系长白猪脾脏组织中扩增猪的TNF-α成熟肽基因.将RT-PCR扩增到的特异性片段克隆到pGEM-T Easy载体中,构建pGEM-TNF重组质粒,经宝生物(大连)有限公司测序,该TNF-α成熟肽基因的长度为465 bp,编码154 aa.以重组克隆质粒pGEM-TNF为模板,PCR扩增猪TNF-α成熟肽基因,并将其插入原核表达载体pET-28a(+)中,在大肠杆菌(E.coli) BL21中诱导表达.SDS-PAGE电泳结果表明表达的融合蛋白约为38 ku,重组蛋白以包涵体形式表达,表达重组蛋白约占菌体总蛋白的36.8％.细胞毒T细胞试验表明所表达的蛋白经初步纯化、变性复性后,可明显增强淋巴毒性T细胞作用.结果提示长白猪肿瘤坏死因子得到了成功克隆与表达,表达的蛋白产物具有一定的生物活性.
本研究旨在剋隆和錶達豬腫瘤壞死因子成熟肽基因及其錶達蛋白的生物活性.根據GenBank登錄的豬腫瘤壞死因子α(TNF-α)成熟肽基因序列設計一對上下遊引物.應用RT-PCR技術直接從丹繫長白豬脾髒組織中擴增豬的TNF-α成熟肽基因.將RT-PCR擴增到的特異性片段剋隆到pGEM-T Easy載體中,構建pGEM-TNF重組質粒,經寶生物(大連)有限公司測序,該TNF-α成熟肽基因的長度為465 bp,編碼154 aa.以重組剋隆質粒pGEM-TNF為模闆,PCR擴增豬TNF-α成熟肽基因,併將其插入原覈錶達載體pET-28a(+)中,在大腸桿菌(E.coli) BL21中誘導錶達.SDS-PAGE電泳結果錶明錶達的融閤蛋白約為38 ku,重組蛋白以包涵體形式錶達,錶達重組蛋白約佔菌體總蛋白的36.8％.細胞毒T細胞試驗錶明所錶達的蛋白經初步純化、變性複性後,可明顯增彊淋巴毒性T細胞作用.結果提示長白豬腫瘤壞死因子得到瞭成功剋隆與錶達,錶達的蛋白產物具有一定的生物活性.
본연구지재극륭화표체저종류배사인자성숙태기인급기표체단백적생물활성.근거GenBank등록적저종류배사인자α(TNF-α)성숙태기인서렬설계일대상하유인물.응용RT-PCR기술직접종단계장백저비장조직중확증저적TNF-α성숙태기인.장RT-PCR확증도적특이성편단극륭도pGEM-T Easy재체중,구건pGEM-TNF중조질립,경보생물(대련)유한공사측서,해TNF-α성숙태기인적장도위465 bp,편마154 aa.이중조극륭질립pGEM-TNF위모판,PCR확증저TNF-α성숙태기인,병장기삽입원핵표체재체pET-28a(+)중,재대장간균(E.coli) BL21중유도표체.SDS-PAGE전영결과표명표체적융합단백약위38 ku,중조단백이포함체형식표체,표체중조단백약점균체총단백적36.8％.세포독T세포시험표명소표체적단백경초보순화、변성복성후,가명현증강림파독성T세포작용.결과제시장백저종류배사인자득도료성공극륭여표체,표체적단백산물구유일정적생물활성.
