中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2011年
6期
1393-1398
,共6页
HL-60细胞%HL-60/ADR细胞%核磷酸蛋白%RNA干扰%慢病毒载体
HL-60細胞%HL-60/ADR細胞%覈燐痠蛋白%RNA榦擾%慢病毒載體
HL-60세포%HL-60/ADR세포%핵린산단백%RNA간우%만병독재체
本研究旨在构建针对HL-60细胞及其耐药细胞株(HL-60/ADR)的NPM1-RNAi的细胞模型,为研究NPM1基因在白血病耐药过程中的作用奠定实验基础.通过针对NPM1基因的shRNA与线性化的pGCSIL-GFP 载体进行连接转化,对获得的重组子(pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA)进行PCR和测序鉴定.采用慢病毒载体系统将pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体与pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA共转染293T细胞,包装成NPM1 -RNAi-LV,将慢病毒载体感染HL-60及HL-60/ADR细胞.采用实时定量RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平验证建立的细胞株的转染效率.结果表明,成功构建了重组真核表达载体pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA,并通过慢病毒载体系统包装成NPM-1-RNAi-LV;将NPM1-RNAi-LV转染至HL-60及HL-60/ADR细胞后,从mRNA水平上看,对细胞的NPM1 mRNA表达有显著抑制,达到90％以上(p＜0.05);从蛋白水平上看,对细胞的NPM蛋白表达具有显著的抑制效果,表明转染后的HL-60及HL-60/ ADR细胞的NPM1基因特异性沉默.NPM1基因沉默后,HL-60/ADR对阿霉素的耐药性有一定程度的下降.结论:成功构建了NPM1-RNAi的HL-60及HL-60/ADR细胞模型,为进一步研究NPM1基因在白血病耐药过程中的作用建立了良好的实验基础.
本研究旨在構建針對HL-60細胞及其耐藥細胞株(HL-60/ADR)的NPM1-RNAi的細胞模型,為研究NPM1基因在白血病耐藥過程中的作用奠定實驗基礎.通過針對NPM1基因的shRNA與線性化的pGCSIL-GFP 載體進行連接轉化,對穫得的重組子(pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA)進行PCR和測序鑒定.採用慢病毒載體繫統將pHelper 1.0載體、pHelper 2.0載體與pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA共轉染293T細胞,包裝成NPM1 -RNAi-LV,將慢病毒載體感染HL-60及HL-60/ADR細胞.採用實時定量RT-PCR和Western blot法分彆從mRNA和蛋白水平驗證建立的細胞株的轉染效率.結果錶明,成功構建瞭重組真覈錶達載體pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA,併通過慢病毒載體繫統包裝成NPM-1-RNAi-LV;將NPM1-RNAi-LV轉染至HL-60及HL-60/ADR細胞後,從mRNA水平上看,對細胞的NPM1 mRNA錶達有顯著抑製,達到90％以上(p＜0.05);從蛋白水平上看,對細胞的NPM蛋白錶達具有顯著的抑製效果,錶明轉染後的HL-60及HL-60/ ADR細胞的NPM1基因特異性沉默.NPM1基因沉默後,HL-60/ADR對阿黴素的耐藥性有一定程度的下降.結論:成功構建瞭NPM1-RNAi的HL-60及HL-60/ADR細胞模型,為進一步研究NPM1基因在白血病耐藥過程中的作用建立瞭良好的實驗基礎.
본연구지재구건침대HL-60세포급기내약세포주(HL-60/ADR)적NPM1-RNAi적세포모형,위연구NPM1기인재백혈병내약과정중적작용전정실험기출.통과침대NPM1기인적shRNA여선성화적pGCSIL-GFP 재체진행련접전화,대획득적중조자(pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA)진행PCR화측서감정.채용만병독재체계통장pHelper 1.0재체、pHelper 2.0재체여pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA공전염293T세포,포장성NPM1 -RNAi-LV,장만병독재체감염HL-60급HL-60/ADR세포.채용실시정량RT-PCR화Western blot법분별종mRNA화단백수평험증건립적세포주적전염효솔.결과표명,성공구건료중조진핵표체재체pGCSIL-GFP-NPM1-shRNA,병통과만병독재체계통포장성NPM-1-RNAi-LV;장NPM1-RNAi-LV전염지HL-60급HL-60/ADR세포후,종mRNA수평상간,대세포적NPM1 mRNA표체유현저억제,체도90％이상(p＜0.05);종단백수평상간,대세포적NPM단백표체구유현저적억제효과,표명전염후적HL-60급HL-60/ ADR세포적NPM1기인특이성침묵.NPM1기인침묵후,HL-60/ADR대아매소적내약성유일정정도적하강.결론:성공구건료NPM1-RNAi적HL-60급HL-60/ADR세포모형,위진일보연구NPM1기인재백혈병내약과정중적작용건립료량호적실험기출.
