CAJ | 학술논문

利用大肠杆菌原核表达系统高效表达大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,并结合蛋白分离纯化技术获得高纯度样品,动态监测其酶活.通过RT-PCR技术,扩增PC12细胞中甘油醛3-磷酸脱氢酶编码序列并亚克隆到原核表达载体pET28b；鉴定正确后,转化人大肠杆菌BL21 (DE3)细胞并采用诱导剂IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导表达,表达产物采用15％ SDS--PAGE鉴定,用镍柱对蛋白进行纯化及脱盐；最后将分离纯化产物在体外进行甘油醛3-磷酸脱氢酶酶活动态分析.结果表明,成功构建大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶的原核表达载体pET28h-G3PDH;高效表达甘油醛3-磷酸脱氢酶,表达产物占总蛋白35％,且发现表达产物主要以可溶形式分布于裂解上清；制备甘油醛3-磷酸脱氢酶纯品并通过酶活动态扫描显示其具有高效酶活性.通过大肠杆菌原核表达技术高效制备具有重要酶活作用的大鼠甘油醛3-磷酸脱氢酶,为进一步研究其在糖代谢中的功能以及其可能的新功能奠定基础.
이용대장간균원핵표체계통고효표체대서감유철3-린산탈경매,병결합단백분리순화기술획득고순도양품,동태감측기매활.통과RT-PCR기술,확증PC12세포중감유철3-린산탈경매편마서렬병아극륭도원핵표체재체pET28b；감정정학후,전화인대장간균BL21 (DE3)세포병채용유도제IPTG(종농도1 mmol/L)유도표체,표체산물채용15％ SDS--PAGE감정,용얼주대단백진행순화급탈염；최후장분리순화산물재체외진행감유철3-린산탈경매매활동태분석.결과표명,성공구건대서감유철3-린산탈경매적원핵표체재체pET28h-G3PDH;고효표체감유철3-린산탈경매,표체산물점총단백35％,차발현표체산물주요이가용형식분포우렬해상청；제비감유철3-린산탈경매순품병통과매활동태소묘현시기구유고효매활성.통과대장간균원핵표체기술고효제비구유중요매활작용적대서감유철3-린산탈경매,위진일보연구기재당대사중적공능이급기가능적신공능전정기출.