苏州大学学报（医学版）
囌州大學學報（醫學版）
소주대학학보（의학판）
SUZHOU UNIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE
2006年
3期
349-353
,共5页
蒋觉安%董万利%胡锦%王元元%惠国桢
蔣覺安%董萬利%鬍錦%王元元%惠國楨
장각안%동만리%호금%왕원원%혜국정
pSUPER质粒%RNA干扰%小干扰RNA%短发夹RNA%神经生长因子
pSUPER質粒%RNA榦擾%小榦擾RNA%短髮夾RNA%神經生長因子
pSUPER질립%RNA간우%소간우RNA%단발협RNA%신경생장인자
目的构建抑制神经生长因子活性的siRNA表达载体.方法构建含有PolⅢ H1启动子的pSUPER-H1质粒,化学合成2对编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,各64个碱基,退火、克隆到经BglⅡ、HindⅢ酶切处理的pSUPER-H1质粒PolⅢ H1启动子下游,获得重组pSUPER-H1质粒,转化感受态大肠杆菌,挑选阳性克隆,抽取重组质粒,EcoRⅠ、HindⅢ双酶切电泳、测序鉴定.结果重组pSUPER-H1质粒成功转化感受态大肠杆菌,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切琼脂糖凝胶电泳分析,表明64个碱基的寡核苷酸成功插入到预计位点,经测序鉴定,表明序列完全一致.结论重组pSUPER-H1载体的成功构建,为进一步研究神经生长因子活性打下基础,同时开展了质粒介导在体内表达siRNA的方法.
目的構建抑製神經生長因子活性的siRNA錶達載體.方法構建含有PolⅢ H1啟動子的pSUPER-H1質粒,化學閤成2對編碼短髮夾RNA的寡覈苷痠序列,各64箇堿基,退火、剋隆到經BglⅡ、HindⅢ酶切處理的pSUPER-H1質粒PolⅢ H1啟動子下遊,穫得重組pSUPER-H1質粒,轉化感受態大腸桿菌,挑選暘性剋隆,抽取重組質粒,EcoRⅠ、HindⅢ雙酶切電泳、測序鑒定.結果重組pSUPER-H1質粒成功轉化感受態大腸桿菌,經EcoRⅠ、HindⅢ雙酶切瓊脂糖凝膠電泳分析,錶明64箇堿基的寡覈苷痠成功插入到預計位點,經測序鑒定,錶明序列完全一緻.結論重組pSUPER-H1載體的成功構建,為進一步研究神經生長因子活性打下基礎,同時開展瞭質粒介導在體內錶達siRNA的方法.
목적구건억제신경생장인자활성적siRNA표체재체.방법구건함유PolⅢ H1계동자적pSUPER-H1질립,화학합성2대편마단발협RNA적과핵감산서렬,각64개감기,퇴화、극륭도경BglⅡ、HindⅢ매절처리적pSUPER-H1질립PolⅢ H1계동자하유,획득중조pSUPER-H1질립,전화감수태대장간균,도선양성극륭,추취중조질립,EcoRⅠ、HindⅢ쌍매절전영、측서감정.결과중조pSUPER-H1질립성공전화감수태대장간균,경EcoRⅠ、HindⅢ쌍매절경지당응효전영분석,표명64개감기적과핵감산성공삽입도예계위점,경측서감정,표명서렬완전일치.결론중조pSUPER-H1재체적성공구건,위진일보연구신경생장인자활성타하기출,동시개전료질립개도재체내표체siRNA적방법.
