西南国防医药
西南國防醫藥
서남국방의약
MEDICAL JOURNAL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN SOUTHWEST CHINA
2008年
1期
4-7,封4
,共5页
陈焕然%黄其林%杨辉%马玉新%阴金波%张伟%严稽文
陳煥然%黃其林%楊輝%馬玉新%陰金波%張偉%嚴稽文
진환연%황기림%양휘%마옥신%음금파%장위%엄계문
少突胶质细胞祖细胞%细胞培养%增强型绿色荧光蛋白%基因转染
少突膠質細胞祖細胞%細胞培養%增彊型綠色熒光蛋白%基因轉染
소돌효질세포조세포%세포배양%증강형록색형광단백%기인전염
目的:建立高效分离少突胶质细胞祖细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的方法,并转染增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因.方法:采用2次接种培养和差速振荡分离,结合使用神经营养因子(bFGF、PDGF-AA),体外分离纯化和扩增培养OPCs,用抗A2B5、GFAP、CNPase免疫荧光抗体鉴定细胞类型.采用脂质体介导EGFP基因转染OPCs,筛选获得稳定表达EGFP的OPCs细胞.结果:分离培养的OPCs细胞呈A2B5阳性,纯度达到99%,具有增殖和双向分化的潜能(GFAP阳性的2型星形胶质细胞和CNPase阳性的少突胶质细胞),传代培养1个月仍具有增殖能力.EGFP基因转染后OPCs细胞能发出绿色荧光,并继续保持增殖分化特性.结论: 二次接种培养和差速振荡分离法可获得高纯度OPCs细胞;EGFP基因转染可作为示踪OPCs迁移的有效方法.
目的:建立高效分離少突膠質細胞祖細胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的方法,併轉染增彊型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因.方法:採用2次接種培養和差速振盪分離,結閤使用神經營養因子(bFGF、PDGF-AA),體外分離純化和擴增培養OPCs,用抗A2B5、GFAP、CNPase免疫熒光抗體鑒定細胞類型.採用脂質體介導EGFP基因轉染OPCs,篩選穫得穩定錶達EGFP的OPCs細胞.結果:分離培養的OPCs細胞呈A2B5暘性,純度達到99%,具有增殖和雙嚮分化的潛能(GFAP暘性的2型星形膠質細胞和CNPase暘性的少突膠質細胞),傳代培養1箇月仍具有增殖能力.EGFP基因轉染後OPCs細胞能髮齣綠色熒光,併繼續保持增殖分化特性.結論: 二次接種培養和差速振盪分離法可穫得高純度OPCs細胞;EGFP基因轉染可作為示蹤OPCs遷移的有效方法.
목적:건립고효분리소돌효질세포조세포(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)적방법,병전염증강형록색형광단백(enhanced green fluorescent protein,EGFP)기인.방법:채용2차접충배양화차속진탕분리,결합사용신경영양인자(bFGF、PDGF-AA),체외분리순화화확증배양OPCs,용항A2B5、GFAP、CNPase면역형광항체감정세포류형.채용지질체개도EGFP기인전염OPCs,사선획득은정표체EGFP적OPCs세포.결과:분리배양적OPCs세포정A2B5양성,순도체도99%,구유증식화쌍향분화적잠능(GFAP양성적2형성형효질세포화CNPase양성적소돌효질세포),전대배양1개월잉구유증식능력.EGFP기인전염후OPCs세포능발출록색형광,병계속보지증식분화특성.결론: 이차접충배양화차속진탕분리법가획득고순도OPCs세포;EGFP기인전염가작위시종OPCs천이적유효방법.
