中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
3期
247-251,256
,共6页
叶菊秀%李玲燕%陈庆新%周继勇
葉菊秀%李玲燕%陳慶新%週繼勇
협국수%리령연%진경신%주계용
传染性法氏囊病病毒%非结构蛋白(NS)%绿色荧光蛋白%Vero细胞
傳染性法氏囊病病毒%非結構蛋白(NS)%綠色熒光蛋白%Vero細胞
전염성법씨낭병병독%비결구단백(NS)%록색형광단백%Vero세포
构建传染性法氏囊病病毒非结构蛋白基因(NS)的重组表达质桓pEGFP-C2-NS,然后在LipofectamineTM2000介导下转染Vem细胞,活细胞状态下直接观察EGFP-NS蛋白在细胞中的表达与定位.结果显示,转染后4～5 h出现荧光蛋白表达,24 h达到高峰,呈小点样环核膜与细胞膜附近沉积,经G418筛选2-3周后稳定表达的荧光蛋白主要分布于细胞膜上.C-418抗性细胞,经RT-PCR和Western-blot验证NS mRNA及其蛋白表达,提示已建立能稳定表达EGFP-NS蛋白的细胞株,所表达蛋白具有NS和EGFP双重活性,为进一步研究NS蛋白凋亡调节机制打下了基础.
構建傳染性法氏囊病病毒非結構蛋白基因(NS)的重組錶達質桓pEGFP-C2-NS,然後在LipofectamineTM2000介導下轉染Vem細胞,活細胞狀態下直接觀察EGFP-NS蛋白在細胞中的錶達與定位.結果顯示,轉染後4～5 h齣現熒光蛋白錶達,24 h達到高峰,呈小點樣環覈膜與細胞膜附近沉積,經G418篩選2-3週後穩定錶達的熒光蛋白主要分佈于細胞膜上.C-418抗性細胞,經RT-PCR和Western-blot驗證NS mRNA及其蛋白錶達,提示已建立能穩定錶達EGFP-NS蛋白的細胞株,所錶達蛋白具有NS和EGFP雙重活性,為進一步研究NS蛋白凋亡調節機製打下瞭基礎.
구건전염성법씨낭병병독비결구단백기인(NS)적중조표체질환pEGFP-C2-NS,연후재LipofectamineTM2000개도하전염Vem세포,활세포상태하직접관찰EGFP-NS단백재세포중적표체여정위.결과현시,전염후4～5 h출현형광단백표체,24 h체도고봉,정소점양배핵막여세포막부근침적,경G418사선2-3주후은정표체적형광단백주요분포우세포막상.C-418항성세포,경RT-PCR화Western-blot험증NS mRNA급기단백표체,제시이건립능은정표체EGFP-NS단백적세포주,소표체단백구유NS화EGFP쌍중활성,위진일보연구NS단백조망조절궤제타하료기출.
