口腔颌面修复学杂志
口腔頜麵脩複學雜誌
구강합면수복학잡지
CHINESE JOURNAL OF PROSTHODONTICS MARCH
2010年
2期
71-74
,共4页
釉原蛋白%真核表达%蛋白质纯化
釉原蛋白%真覈錶達%蛋白質純化
유원단백%진핵표체%단백질순화
目的:通过固相化金属亲和层析的方法,获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋白.方法:将重组表达质粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B转染至HEK 293A细胞中,用G418持续筛选,培养扩增.收集细胞,加入RIPA细胞裂解液,粗提蛋白.通过镍金属蟹合层析的方法,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot检测,检测蛋白纯化程度和产率.将釉原蛋白冻干,-80℃冻存.结果:SDS-PAGE及Western Blot检测结果表明,蛋白粗提液中有大小约50KDa的重组釉原蛋白表达,经过HisTrapHP column层析,目的蛋白形成了单一条带,纯化率为91.3%.结论:本实验通过固相化金属亲和层析的方法,获得了高纯度的重组釉原蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础.
目的:通過固相化金屬親和層析的方法,穫得較高純度的具有生物活性的重組釉原蛋白.方法:將重組錶達質粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B轉染至HEK 293A細胞中,用G418持續篩選,培養擴增.收集細胞,加入RIPA細胞裂解液,粗提蛋白.通過鎳金屬蟹閤層析的方法,純化目的蛋白,併進行SDS-PAGE和Western blot檢測,檢測蛋白純化程度和產率.將釉原蛋白凍榦,-80℃凍存.結果:SDS-PAGE及Western Blot檢測結果錶明,蛋白粗提液中有大小約50KDa的重組釉原蛋白錶達,經過HisTrapHP column層析,目的蛋白形成瞭單一條帶,純化率為91.3%.結論:本實驗通過固相化金屬親和層析的方法,穫得瞭高純度的重組釉原蛋白,為進一步研究蛋白質功能奠定瞭基礎.
목적:통과고상화금속친화층석적방법,획득교고순도적구유생물활성적중조유원단백.방법:장중조표체질립pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B전염지HEK 293A세포중,용G418지속사선,배양확증.수집세포,가입RIPA세포렬해액,조제단백.통과얼금속해합층석적방법,순화목적단백,병진행SDS-PAGE화Western blot검측,검측단백순화정도화산솔.장유원단백동간,-80℃동존.결과:SDS-PAGE급Western Blot검측결과표명,단백조제액중유대소약50KDa적중조유원단백표체,경과HisTrapHP column층석,목적단백형성료단일조대,순화솔위91.3%.결론:본실험통과고상화금속친화층석적방법,획득료고순도적중조유원단백,위진일보연구단백질공능전정료기출.
