浙江大学学报（农业与生命科学版）
浙江大學學報（農業與生命科學版）
절강대학학보（농업여생명과학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)
2010年
3期
269-274
,共6页
万晓媛%扈鸿霞%陈宁%邹晓庭%李肖梁
萬曉媛%扈鴻霞%陳寧%鄒曉庭%李肖樑
만효원%호홍하%진저%추효정%리초량
猪呼吸与繁殖综合征病毒%核衣壳蛋白%卵黄抗体%ELISA
豬呼吸與繁殖綜閤徵病毒%覈衣殼蛋白%卵黃抗體%ELISA
저호흡여번식종합정병독%핵의각단백%란황항체%ELISA
将猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)的基因片段克隆至载体pET-30a,转化重组质粒至Escherichia coli BL21(DE3)表达融合蛋白6×His-N,并以其为抗原免疫蛋鸡,制备特异性抗PRRSV-N卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin,IgY).结果显示: 6×His-N在BL21中的表达量为60.2 mg·L-1;将纯化浓缩的6×His-N与弗氏佐剂乳化,连续3次免疫海兰蛋鸡后,经ELISA检测,首免后第36天抗6×His-N IgY抗体为阳性(P/N=2.44);第83天的P/N值达到最高,为5.63,抗体经1∶640稀释后,P/N值为2.29;经SDS-PAGE和Western blot分析,提取的卵黄抗体的纯度高且具有良好的免疫反应性.研究表明,抗PRRSV-N蛋白的IgY制备具有简便、成本低廉等特点,可用于PRRSV检测试剂盒的开发.
將豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)覈衣殼蛋白(nucleocapsid protein,NP)的基因片段剋隆至載體pET-30a,轉化重組質粒至Escherichia coli BL21(DE3)錶達融閤蛋白6×His-N,併以其為抗原免疫蛋鷄,製備特異性抗PRRSV-N卵黃抗體(egg yolk immunoglobulin,IgY).結果顯示: 6×His-N在BL21中的錶達量為60.2 mg·L-1;將純化濃縮的6×His-N與弗氏佐劑乳化,連續3次免疫海蘭蛋鷄後,經ELISA檢測,首免後第36天抗6×His-N IgY抗體為暘性(P/N=2.44);第83天的P/N值達到最高,為5.63,抗體經1∶640稀釋後,P/N值為2.29;經SDS-PAGE和Western blot分析,提取的卵黃抗體的純度高且具有良好的免疫反應性.研究錶明,抗PRRSV-N蛋白的IgY製備具有簡便、成本低廉等特點,可用于PRRSV檢測試劑盒的開髮.
장저번식여호흡종합정병독(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)핵의각단백(nucleocapsid protein,NP)적기인편단극륭지재체pET-30a,전화중조질립지Escherichia coli BL21(DE3)표체융합단백6×His-N,병이기위항원면역단계,제비특이성항PRRSV-N란황항체(egg yolk immunoglobulin,IgY).결과현시: 6×His-N재BL21중적표체량위60.2 mg·L-1;장순화농축적6×His-N여불씨좌제유화,련속3차면역해란단계후,경ELISA검측,수면후제36천항6×His-N IgY항체위양성(P/N=2.44);제83천적P/N치체도최고,위5.63,항체경1∶640희석후,P/N치위2.29;경SDS-PAGE화Western blot분석,제취적란황항체적순도고차구유량호적면역반응성.연구표명,항PRRSV-N단백적IgY제비구유간편、성본저렴등특점,가용우PRRSV검측시제합적개발.
