交通医学
交通醫學
교통의학
MEDICAL JOURNAL OF COMMUNICATIONS
2010年
5期
463-465
,共3页
刘燕%彭聿平%黄彦%黄慧伟%邱一华
劉燕%彭聿平%黃彥%黃慧偉%邱一華
류연%팽율평%황언%황혜위%구일화
酪氨酸羟化酶%pGEM-T载体%T-A克隆法%实时定量聚合酶链反应
酪氨痠羥化酶%pGEM-T載體%T-A剋隆法%實時定量聚閤酶鏈反應
락안산간화매%pGEM-T재체%T-A극륭법%실시정량취합매련반응
目的:用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQPCR)方法制备标准品.方法:提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品.结果:肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线.结论:该方法能大量制备TH质粒标准品,并且可推广应用.
目的:用T-A剋隆法構建含酪氨痠羥化酶(TH)基因的重組質粒,併用實時定量PCR(RQPCR)方法製備標準品.方法:提取小鼠腎上腺髓質組織總RNA,逆轉錄為cDNA後進行RT-PCR,迴收純化電泳膠,T-A剋隆與pGEM-T載體連接,轉化Top-10感受態細菌,藍白斑篩選齣暘性菌落後,大量提取質粒,再進行RQPCR反應,最後製得含TH的重組質粒標準品.結果:腎上腺髓質TH的錶達,PCR擴增,菌液PCR,測序鑒定均證實TH重組到pGEM-T載體上,經RQPCR定量後得到TH重組質粒標準品的標準麯線.結論:該方法能大量製備TH質粒標準品,併且可推廣應用.
목적:용T-A극륭법구건함락안산간화매(TH)기인적중조질립,병용실시정량PCR(RQPCR)방법제비표준품.방법:제취소서신상선수질조직총RNA,역전록위cDNA후진행RT-PCR,회수순화전영효,T-A극륭여pGEM-T재체련접,전화Top-10감수태세균,람백반사선출양성균락후,대량제취질립,재진행RQPCR반응,최후제득함TH적중조질립표준품.결과:신상선수질TH적표체,PCR확증,균액PCR,측서감정균증실TH중조도pGEM-T재체상,경RQPCR정량후득도TH중조질립표준품적표준곡선.결론:해방법능대량제비TH질립표준품,병차가추엄응용.
