动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2010年
12期
1-5
,共5页
曾爽%陈国华%崔青%房永祥%景志忠
曾爽%陳國華%崔青%房永祥%景誌忠
증상%진국화%최청%방영상%경지충
猪MyD88分子%原核表达%大肠埃希菌
豬MyD88分子%原覈錶達%大腸埃希菌
저MyD88분자%원핵표체%대장애희균
采用PCR方法从pGEM-pMyD88重组质粒中克隆了猪MyD88分子全长基因,构建了无信号肽序列的原核表达载体pET-30a-pMyD88-ED,在不同IPTG浓度和时间下进行诱导表达,利用切胶洗脱法纯化表达的融合蛋白.结果表明,在IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为6 h时表达量达到最大,SDS-PAGE分析表明表达出约35 ku的融合蛋白,主要以包涵体的形式存在;通过切胶纯化后,融合蛋白的纯度可达90%;Western blot分析显示,表达的融合蛋白能被抗His标签的单克隆抗体识别,说明目的蛋白在大肠埃希菌中得到了成功表达.
採用PCR方法從pGEM-pMyD88重組質粒中剋隆瞭豬MyD88分子全長基因,構建瞭無信號肽序列的原覈錶達載體pET-30a-pMyD88-ED,在不同IPTG濃度和時間下進行誘導錶達,利用切膠洗脫法純化錶達的融閤蛋白.結果錶明,在IPTG誘導濃度為0.05 mmol/L,誘導時間為6 h時錶達量達到最大,SDS-PAGE分析錶明錶達齣約35 ku的融閤蛋白,主要以包涵體的形式存在;通過切膠純化後,融閤蛋白的純度可達90%;Western blot分析顯示,錶達的融閤蛋白能被抗His標籤的單剋隆抗體識彆,說明目的蛋白在大腸埃希菌中得到瞭成功錶達.
채용PCR방법종pGEM-pMyD88중조질립중극륭료저MyD88분자전장기인,구건료무신호태서렬적원핵표체재체pET-30a-pMyD88-ED,재불동IPTG농도화시간하진행유도표체,이용절효세탈법순화표체적융합단백.결과표명,재IPTG유도농도위0.05 mmol/L,유도시간위6 h시표체량체도최대,SDS-PAGE분석표명표체출약35 ku적융합단백,주요이포함체적형식존재;통과절효순화후,융합단백적순도가체90%;Western blot분석현시,표체적융합단백능피항His표첨적단극륭항체식별,설명목적단백재대장애희균중득도료성공표체.
