基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2011年
5期
485-489
,共5页
PNPLA3%过表达%干扰%腺病毒
PNPLA3%過錶達%榦擾%腺病毒
PNPLA3%과표체%간우%선병독
目的 构建糖脂代谢和脂肪肝相关基因PNPLA3过表达以及干扰腺病毒载体并加以鉴定.方法 根据PNPLA3基因序列设计过表达以及干扰序列引物,定向克隆人穿梭载体pAdTraek-CMV的Bgl Ⅱ和Xho I位点,干扰序列克隆人pAdTrack-U6穿梭载体,Pme I酶切线性化穿梭质粒与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共转化E.coli BJ5183感受态细菌产生重组腺病毒载体,用Pac I酶切线性化的回收质粒转染293A细胞包装腺病毒颗粒,在倒置荧光显微镜下观察293A细胞绿色荧光蛋白的表达,并初步观察其感染小鼠原代细胞的效率.结果 测序、酶切鉴定证实,构建出了PNPL43基因过表达及干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为1.5×10<'11>VP/mL.以120感染复数感染小鼠肝脏原代细胞,感染效率可达到90%以上,干扰效率超过80%以上.结论 成功构建了PNPLA3基因的过表达以及干扰腺病毒载体.
目的 構建糖脂代謝和脂肪肝相關基因PNPLA3過錶達以及榦擾腺病毒載體併加以鑒定.方法 根據PNPLA3基因序列設計過錶達以及榦擾序列引物,定嚮剋隆人穿梭載體pAdTraek-CMV的Bgl Ⅱ和Xho I位點,榦擾序列剋隆人pAdTrack-U6穿梭載體,Pme I酶切線性化穿梭質粒與腺病毒載體(pAdEasy-1質粒)共轉化E.coli BJ5183感受態細菌產生重組腺病毒載體,用Pac I酶切線性化的迴收質粒轉染293A細胞包裝腺病毒顆粒,在倒置熒光顯微鏡下觀察293A細胞綠色熒光蛋白的錶達,併初步觀察其感染小鼠原代細胞的效率.結果 測序、酶切鑒定證實,構建齣瞭PNPL43基因過錶達及榦擾腺病毒載體.包裝的腺病毒濃縮懸液滴度為1.5×10<'11>VP/mL.以120感染複數感染小鼠肝髒原代細胞,感染效率可達到90%以上,榦擾效率超過80%以上.結論 成功構建瞭PNPLA3基因的過錶達以及榦擾腺病毒載體.
목적 구건당지대사화지방간상관기인PNPLA3과표체이급간우선병독재체병가이감정.방법 근거PNPLA3기인서렬설계과표체이급간우서렬인물,정향극륭인천사재체pAdTraek-CMV적Bgl Ⅱ화Xho I위점,간우서렬극륭인pAdTrack-U6천사재체,Pme I매절선성화천사질립여선병독재체(pAdEasy-1질립)공전화E.coli BJ5183감수태세균산생중조선병독재체,용Pac I매절선성화적회수질립전염293A세포포장선병독과립,재도치형광현미경하관찰293A세포록색형광단백적표체,병초보관찰기감염소서원대세포적효솔.결과 측서、매절감정증실,구건출료PNPL43기인과표체급간우선병독재체.포장적선병독농축현액적도위1.5×10<'11>VP/mL.이120감염복수감염소서간장원대세포,감염효솔가체도90%이상,간우효솔초과80%이상.결론 성공구건료PNPLA3기인적과표체이급간우선병독재체.
