动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2011年
7期
13-18
,共6页
孙涛%肖西志%徐彪%梁成珠%凌宗帅%张太翔%岳志芹
孫濤%肖西誌%徐彪%樑成珠%凌宗帥%張太翔%嶽誌芹
손도%초서지%서표%량성주%릉종수%장태상%악지근
Ⅰ型鸭肝炎病毒%RT-PCR%变性高效液相色谱
Ⅰ型鴨肝炎病毒%RT-PCR%變性高效液相色譜
Ⅰ형압간염병독%RT-PCR%변성고효액상색보
用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法.根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测.以正常鸭胚尿囊液、正常鸭肝组织、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、H5N1亚型禽流感病毒、鸭源新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒作对照进行特异性检测;将强毒株核酸稀释成不同梯度,做灵敏度检测；同时将该方法与病毒分离和荧光定量RT-PCR方法做人工感染样品的平行检测.结果表明,该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到4 pg的DHV I核酸模板,与荧光定量PCR检测结果一致.PCR-DHPLC对DHV I强毒株人工感染鸭组织脏器的检测结果与荧光定量PCR检测结果的阳性检出率均为100%,对脑、脾、肺病料的检出率显著(P≤0.01)高于病毒分离,PCR-DHPLC与荧光RT-PCR检测方法相比较,两种方法检测DHV I的符合率为100%.研究表明该方法可用于诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒,是一种有效的新方法.
用RT-PCR結閤變性高效液相色譜技術(DHPLC),建立Ⅰ型鴨肝炎病毒的快速檢測方法.根據穫得的Ⅰ型鴨肝炎病毒(DHV I)RNA聚閤酶基因序列,應用Primer Premier5.0軟件設計瞭1對引物,RT-PCR擴增產物經變性高效液相色譜進行快速檢測.以正常鴨胚尿囊液、正常鴨肝組織、鴨瘟病毒、番鴨細小病毒、鵝細小病毒、H5N1亞型禽流感病毒、鴨源新城疫病毒、傳染性法氏囊病病毒作對照進行特異性檢測;將彊毒株覈痠稀釋成不同梯度,做靈敏度檢測；同時將該方法與病毒分離和熒光定量RT-PCR方法做人工感染樣品的平行檢測.結果錶明,該方法有很好的特異性,且靈敏度高,檢測限可達到4 pg的DHV I覈痠模闆,與熒光定量PCR檢測結果一緻.PCR-DHPLC對DHV I彊毒株人工感染鴨組織髒器的檢測結果與熒光定量PCR檢測結果的暘性檢齣率均為100%,對腦、脾、肺病料的檢齣率顯著(P≤0.01)高于病毒分離,PCR-DHPLC與熒光RT-PCR檢測方法相比較,兩種方法檢測DHV I的符閤率為100%.研究錶明該方法可用于診斷Ⅰ型鴨肝炎病毒,是一種有效的新方法.
용RT-PCR결합변성고효액상색보기술(DHPLC),건립Ⅰ형압간염병독적쾌속검측방법.근거획득적Ⅰ형압간염병독(DHV I)RNA취합매기인서렬,응용Primer Premier5.0연건설계료1대인물,RT-PCR확증산물경변성고효액상색보진행쾌속검측.이정상압배뇨낭액、정상압간조직、압온병독、번압세소병독、아세소병독、H5N1아형금류감병독、압원신성역병독、전염성법씨낭병병독작대조진행특이성검측;장강독주핵산희석성불동제도,주령민도검측；동시장해방법여병독분리화형광정량RT-PCR방법주인공감염양품적평행검측.결과표명,해방법유흔호적특이성,차령민도고,검측한가체도4 pg적DHV I핵산모판,여형광정량PCR검측결과일치.PCR-DHPLC대DHV I강독주인공감염압조직장기적검측결과여형광정량PCR검측결과적양성검출솔균위100%,대뇌、비、폐병료적검출솔현저(P≤0.01)고우병독분리,PCR-DHPLC여형광RT-PCR검측방법상비교,량충방법검측DHV I적부합솔위100%.연구표명해방법가용우진단Ⅰ형압간염병독,시일충유효적신방법.
