中国现代手术学杂志
中國現代手術學雜誌
중국현대수술학잡지
CHINESE JOURNAL OF MODERN OPERATIVE SURGERY
2011年
6期
401-406
,共6页
郑核%钟德玝%何自力%苗雄鹰%文宇%刘威%陈广
鄭覈%鐘德玝%何自力%苗雄鷹%文宇%劉威%陳廣
정핵%종덕오%하자력%묘웅응%문우%류위%진엄
肝肿瘤,实验性%RNA干扰%Plk1
肝腫瘤,實驗性%RNA榦擾%Plk1
간종류,실험성%RNA간우%Plk1
目的 利用RNA(RNAi)干扰技术,研究表达Polo-like kinase 1(Plk1)的短发夹RNA( shRNA)载体对肝癌细胞株BEL-7402生物学行为的影响.方法 根据靶基因的不同区域构建针对Plk1mRNA的两组干扰质粒shRNA- Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及阴性对照质粒Plk1siRNAhk,利用电穿孔法转染入肝癌细胞株BEL-7402,获得稳定表达的克隆后,RT-PCR检测肝癌细胞株BEL7402的Plk1mRNA的变化,Western blot检测Plk1蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 利用电穿孔将载体转入肝癌细胞株BEL-7402,利用G418筛选,获得稳定表达的克隆.RT-PCR检测Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396组Plk1mRNA表达较Plk1siRNA-hk转染组与空白对照组明显下降(P＜0.01).Western blot检测转染BEL-7402细胞shRNA载体后的Plk1蛋白的表达分别为0.032±0.007、0.040±0.008、0.272±0.041、0.278±0.053.MTT检测发现转染shRNA载体后BEL-7402细胞增殖明显减慢.细胞周期检测证实转染Plk1siRNA可以引起BEL-7402细胞G0/G1期减少,G2/M期增高,而对S期影响不大.结论 成功构建出两条能特异而高效抑制Plk1基因表达的shRNA,可以显著抑制Plk1 mRNA的转录及Plk1蛋白的表达,并明显抑制细胞增殖,从而为肝癌的基因治疗提供新的切入点.
目的 利用RNA(RNAi)榦擾技術,研究錶達Polo-like kinase 1(Plk1)的短髮夾RNA( shRNA)載體對肝癌細胞株BEL-7402生物學行為的影響.方法 根據靶基因的不同區域構建針對Plk1mRNA的兩組榦擾質粒shRNA- Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396以及陰性對照質粒Plk1siRNAhk,利用電穿孔法轉染入肝癌細胞株BEL-7402,穫得穩定錶達的剋隆後,RT-PCR檢測肝癌細胞株BEL7402的Plk1mRNA的變化,Western blot檢測Plk1蛋白的錶達,MTT法檢測細胞增殖,流式細胞儀檢測細胞週期變化.結果 利用電穿孔將載體轉入肝癌細胞株BEL-7402,利用G418篩選,穫得穩定錶達的剋隆.RT-PCR檢測Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396組Plk1mRNA錶達較Plk1siRNA-hk轉染組與空白對照組明顯下降(P＜0.01).Western blot檢測轉染BEL-7402細胞shRNA載體後的Plk1蛋白的錶達分彆為0.032±0.007、0.040±0.008、0.272±0.041、0.278±0.053.MTT檢測髮現轉染shRNA載體後BEL-7402細胞增殖明顯減慢.細胞週期檢測證實轉染Plk1siRNA可以引起BEL-7402細胞G0/G1期減少,G2/M期增高,而對S期影響不大.結論 成功構建齣兩條能特異而高效抑製Plk1基因錶達的shRNA,可以顯著抑製Plk1 mRNA的轉錄及Plk1蛋白的錶達,併明顯抑製細胞增殖,從而為肝癌的基因治療提供新的切入點.
목적 이용RNA(RNAi)간우기술,연구표체Polo-like kinase 1(Plk1)적단발협RNA( shRNA)재체대간암세포주BEL-7402생물학행위적영향.방법 근거파기인적불동구역구건침대Plk1mRNA적량조간우질립shRNA- Plk1:Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396이급음성대조질립Plk1siRNAhk,이용전천공법전염입간암세포주BEL-7402,획득은정표체적극륭후,RT-PCR검측간암세포주BEL7402적Plk1mRNA적변화,Western blot검측Plk1단백적표체,MTT법검측세포증식,류식세포의검측세포주기변화.결과 이용전천공장재체전입간암세포주BEL-7402,이용G418사선,획득은정표체적극륭.RT-PCR검측Plk1siRNA-251,Plk1siRNA-1396조Plk1mRNA표체교Plk1siRNA-hk전염조여공백대조조명현하강(P＜0.01).Western blot검측전염BEL-7402세포shRNA재체후적Plk1단백적표체분별위0.032±0.007、0.040±0.008、0.272±0.041、0.278±0.053.MTT검측발현전염shRNA재체후BEL-7402세포증식명현감만.세포주기검측증실전염Plk1siRNA가이인기BEL-7402세포G0/G1기감소,G2/M기증고,이대S기영향불대.결론 성공구건출량조능특이이고효억제Plk1기인표체적shRNA,가이현저억제Plk1 mRNA적전록급Plk1단백적표체,병명현억제세포증식,종이위간암적기인치료제공신적절입점.
