生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2012年
2期
159-164
,共6页
赖呈纯%范丽华%谢鸿根%余亚白%郑铭西%谢福鑫
賴呈純%範麗華%謝鴻根%餘亞白%鄭銘西%謝福鑫
뢰정순%범려화%사홍근%여아백%정명서%사복흠
葡萄ISSR-PCR%正交设计%单因素试验%反应体系
葡萄ISSR-PCR%正交設計%單因素試驗%反應體繫
포도ISSR-PCR%정교설계%단인소시험%반응체계
采用正交设计L9 (34)对影响葡萄ISSR-PCR反应体系的4个因素(dNTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA)在3个浓度水平上进行试验,并通过直观分析初步确定其反应体系;在此基础上,通过单因素试验探讨了dNTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA、退火温度及循环次数等因素或条件对葡萄ISSR-PCR扩增结果的影响,确定最佳反应水平.最终建立了葡萄ISSR-PCR扩增的最佳反应体系:在25μL的反应体系中,dNTP浓度0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶的用量0.5 U,引物浓度0.4mmol/L,DNA模板用量40 ng.反应程序:94℃预变性5min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72C延伸1 min 30 s,40次循环;最后72℃延伸10 min,10℃保存.
採用正交設計L9 (34)對影響葡萄ISSR-PCR反應體繫的4箇因素(dNTP、Taq DNA聚閤酶、引物、模闆DNA)在3箇濃度水平上進行試驗,併通過直觀分析初步確定其反應體繫;在此基礎上,通過單因素試驗探討瞭dNTP、Taq DNA聚閤酶、引物、模闆DNA、退火溫度及循環次數等因素或條件對葡萄ISSR-PCR擴增結果的影響,確定最佳反應水平.最終建立瞭葡萄ISSR-PCR擴增的最佳反應體繫:在25μL的反應體繫中,dNTP濃度0.2 mmol/L,TaqDNA聚閤酶的用量0.5 U,引物濃度0.4mmol/L,DNA模闆用量40 ng.反應程序:94℃預變性5min;94℃變性1 min,52℃退火1 min,72C延伸1 min 30 s,40次循環;最後72℃延伸10 min,10℃保存.
채용정교설계L9 (34)대영향포도ISSR-PCR반응체계적4개인소(dNTP、Taq DNA취합매、인물、모판DNA)재3개농도수평상진행시험,병통과직관분석초보학정기반응체계;재차기출상,통과단인소시험탐토료dNTP、Taq DNA취합매、인물、모판DNA、퇴화온도급순배차수등인소혹조건대포도ISSR-PCR확증결과적영향,학정최가반응수평.최종건립료포도ISSR-PCR확증적최가반응체계:재25μL적반응체계중,dNTP농도0.2 mmol/L,TaqDNA취합매적용량0.5 U,인물농도0.4mmol/L,DNA모판용량40 ng.반응정서:94℃예변성5min;94℃변성1 min,52℃퇴화1 min,72C연신1 min 30 s,40차순배;최후72℃연신10 min,10℃보존.
