江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2012年
4期
886-890
,共5页
徐重新%张霄%刘媛%王耘%张存政%刘贤进
徐重新%張霄%劉媛%王耘%張存政%劉賢進
서중신%장소%류원%왕운%장존정%류현진
噬菌体抗体库%Cry1B毒蛋白质%单链抗体%ELISA
噬菌體抗體庫%Cry1B毒蛋白質%單鏈抗體%ELISA
서균체항체고%Cry1B독단백질%단련항체%ELISA
利用人源化噬菌体抗体库筛选抗Bt Cry1B毒蛋白质的单链抗体(Single-chain antibodies,scFFv).将扩增后的噬菌体抗体库与固相化包被的Cry1B毒蛋白质特异性结合,经4轮“吸附-洗脱-扩增”后,富集特异性识别Cry1B毒蛋白质的噬菌体单链抗体.从最后一轮筛选中随机挑取单菌落进行单克隆ELISA鉴定,对阳性克隆进行PCR扩增、DNA电泳鉴定及测序,成功筛选获得8个阳性噬菌体scFvs,经鉴定均有完整外源基因片段插入.挑取阳性值最高的scFv(1E2)建立了基于单链抗体的Cry1B毒蛋白质间接竞争ELISA检测方法.结果表明,Cry1B毒蛋白质对噬菌体scFv(1E2)的抑制中浓度(IC50)为1.075 μg/ml,最低检测限(IC10)为0.013 4 μg,/ml,线性检测范围在0.5 ug/ml至4.0,μg/ml之间.
利用人源化噬菌體抗體庫篩選抗Bt Cry1B毒蛋白質的單鏈抗體(Single-chain antibodies,scFFv).將擴增後的噬菌體抗體庫與固相化包被的Cry1B毒蛋白質特異性結閤,經4輪“吸附-洗脫-擴增”後,富集特異性識彆Cry1B毒蛋白質的噬菌體單鏈抗體.從最後一輪篩選中隨機挑取單菌落進行單剋隆ELISA鑒定,對暘性剋隆進行PCR擴增、DNA電泳鑒定及測序,成功篩選穫得8箇暘性噬菌體scFvs,經鑒定均有完整外源基因片段插入.挑取暘性值最高的scFv(1E2)建立瞭基于單鏈抗體的Cry1B毒蛋白質間接競爭ELISA檢測方法.結果錶明,Cry1B毒蛋白質對噬菌體scFv(1E2)的抑製中濃度(IC50)為1.075 μg/ml,最低檢測限(IC10)為0.013 4 μg,/ml,線性檢測範圍在0.5 ug/ml至4.0,μg/ml之間.
이용인원화서균체항체고사선항Bt Cry1B독단백질적단련항체(Single-chain antibodies,scFFv).장확증후적서균체항체고여고상화포피적Cry1B독단백질특이성결합,경4륜“흡부-세탈-확증”후,부집특이성식별Cry1B독단백질적서균체단련항체.종최후일륜사선중수궤도취단균락진행단극륭ELISA감정,대양성극륭진행PCR확증、DNA전영감정급측서,성공사선획득8개양성서균체scFvs,경감정균유완정외원기인편단삽입.도취양성치최고적scFv(1E2)건립료기우단련항체적Cry1B독단백질간접경쟁ELISA검측방법.결과표명,Cry1B독단백질대서균체scFv(1E2)적억제중농도(IC50)위1.075 μg/ml,최저검측한(IC10)위0.013 4 μg,/ml,선성검측범위재0.5 ug/ml지4.0,μg/ml지간.
