中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2003年
6期
576-580
,共5页
徐青%扈荣良%张守峰%梁冠生
徐青%扈榮良%張守峰%樑冠生
서청%호영량%장수봉%량관생
山羊β-酪蛋白启动子%通用表达载体%暂时表达%组织型纤溶酶原激活剂
山羊β-酪蛋白啟動子%通用錶達載體%暫時錶達%組織型纖溶酶原激活劑
산양β-락단백계동자%통용표체재체%잠시표체%조직형섬용매원격활제
为了实现外源蛋白在动物乳腺中的特异性高效表达,利用山羊β-酪蛋白5＇端1.132kb的侧翼调控序列、牛生长激素基因polyA(BGHPA)序列、基质结合区(matrix attachment region,MAR)和多克隆位点(MCS),构建了乳腺组织定位通用表达载体pMRPA,鉴定正确后,将2.1kb的人组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,tPA)cDNA克隆到pMRPA多克隆位点,获得重组表达载体pMRPA-tPA.在不同的泌乳时间,使用不同的包裹剂,采用不同的剂量,将pMRPA-tPA注入泌乳期山羊乳腺组织进行暂时表达.结果显示,所构建的乳腺组织特异性通用表达载体能够有效地指导目的基因的高效表达.通过乳腺暂时表达试验进一步发现,泌乳稳定期表达效果最好,tPA表达水平在2.020～6.959 mg/L;表达量随DNA用量的增加而提高;使用普通包裹剂和裸质粒相比,普通包裹剂对表达效果无明显影响.本试验对乳腺暂时表达系统进行了系统性研究,为通过乳腺暂时表达系统改良乳汁蛋白组成提供了重要依据.
為瞭實現外源蛋白在動物乳腺中的特異性高效錶達,利用山羊β-酪蛋白5＇耑1.132kb的側翼調控序列、牛生長激素基因polyA(BGHPA)序列、基質結閤區(matrix attachment region,MAR)和多剋隆位點(MCS),構建瞭乳腺組織定位通用錶達載體pMRPA,鑒定正確後,將2.1kb的人組織型纖溶酶原激活劑(tissue-type plasminogen activator,tPA)cDNA剋隆到pMRPA多剋隆位點,穫得重組錶達載體pMRPA-tPA.在不同的泌乳時間,使用不同的包裹劑,採用不同的劑量,將pMRPA-tPA註入泌乳期山羊乳腺組織進行暫時錶達.結果顯示,所構建的乳腺組織特異性通用錶達載體能夠有效地指導目的基因的高效錶達.通過乳腺暫時錶達試驗進一步髮現,泌乳穩定期錶達效果最好,tPA錶達水平在2.020～6.959 mg/L;錶達量隨DNA用量的增加而提高;使用普通包裹劑和裸質粒相比,普通包裹劑對錶達效果無明顯影響.本試驗對乳腺暫時錶達繫統進行瞭繫統性研究,為通過乳腺暫時錶達繫統改良乳汁蛋白組成提供瞭重要依據.
위료실현외원단백재동물유선중적특이성고효표체,이용산양β-락단백5＇단1.132kb적측익조공서렬、우생장격소기인polyA(BGHPA)서렬、기질결합구(matrix attachment region,MAR)화다극륭위점(MCS),구건료유선조직정위통용표체재체pMRPA,감정정학후,장2.1kb적인조직형섬용매원격활제(tissue-type plasminogen activator,tPA)cDNA극륭도pMRPA다극륭위점,획득중조표체재체pMRPA-tPA.재불동적비유시간,사용불동적포과제,채용불동적제량,장pMRPA-tPA주입비유기산양유선조직진행잠시표체.결과현시,소구건적유선조직특이성통용표체재체능구유효지지도목적기인적고효표체.통과유선잠시표체시험진일보발현,비유은정기표체효과최호,tPA표체수평재2.020～6.959 mg/L;표체량수DNA용량적증가이제고;사용보통포과제화라질립상비,보통포과제대표체효과무명현영향.본시험대유선잠시표체계통진행료계통성연구,위통과유선잠시표체계통개량유즙단백조성제공료중요의거.
