CAJ | 학술논문

背景与目的:T-bet(T box expressed in T cells)是一种特异性调控Th1淋巴细胞的核转录因子,它广泛调控多种免疫细胞(如Th1、NK、CD8+、DC、B细胞等)的生物学活性.本研究观察转染小鼠T-bet基因(pcDNA3.0-mT-bet)对小鼠巨噬细胞Raw264.7生物学功能的影响.方法:构建含T-bet的真核表达载体pcDNA3.0-mT-bet,通过双酶切鉴定及测序、PCR鉴定其准确性,RT-PCR及Western blot检测其在Raw264.7细胞中的表达.以PBS、pcDNA3.0空载体作为对照,将其瞬时转染入Raw264.7细胞,48 h后观察其对细胞周期、细胞表面分子MHC Ⅰ/Ⅱ表达的影响,以及对FITC-右旋糖酐(FITC-dextran)的吞噬能力、一氧化氮(nitric oxide,NO)分泌水平及T-bet对小鼠白血病细胞L1210的杀伤活性.结果:载体pcDNA3.0-mT-bet构建成功并在Raw264.7细胞中表达;T-bet对Raw264.7细胞周期没有影响(P＞0.05);经T-bet修饰后,细胞表面MHC Ⅰ类分子的表达(24.8±0.6)高于空载体组(20.8±0.7),有统计学意义(P＜0.05);但两组间MHCⅡ类分子的表达无显著性差异(P＞0.05).T-bet修饰组吞噬Dextran的平均荧光强度(32.8±0.8)高于空载体组(28.2±0.4),有统计学意义(P＜0.05).在无脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激时,T-bet组NO的产生量[(1.7±0.6)pmol]高于空载体组,两组相比差异有显著性(P＜0.05);经10 μg/ml LPS持续刺激20 h后,T-bet组NO的产生量[(15.6±±1.6)pmol]显著高于空载体组[(10.5±1.3)pmol](P＜0.05).pcDNA3.0-mT-bet对L1210细胞的体外杀伤活性[(51.9±3.5)%]明显高于空载体组[(35.6±2.1)%],差异有显著性(P＜0.05).结论:T-bet可诱导Raw264.7细胞表达MHC Ⅰ类分子,增强其对Dextran的吞噬能力,促进其分泌NO,增加其对L1210细胞的杀伤活性,但对其细胞周期及MHCⅡ类分子的表达无影响.
배경여목적:T-bet(T box expressed in T cells)시일충특이성조공Th1림파세포적핵전록인자,타엄범조공다충면역세포(여Th1、NK、CD8+、DC、B세포등)적생물학활성.본연구관찰전염소서T-bet기인(pcDNA3.0-mT-bet)대소서거서세포Raw264.7생물학공능적영향.방법:구건함T-bet적진핵표체재체pcDNA3.0-mT-bet,통과쌍매절감정급측서、PCR감정기준학성,RT-PCR급Western blot검측기재Raw264.7세포중적표체.이PBS、pcDNA3.0공재체작위대조,장기순시전염입Raw264.7세포,48 h후관찰기대세포주기、세포표면분자MHC Ⅰ/Ⅱ표체적영향,이급대FITC-우선당항(FITC-dextran)적탄서능력、일양화담(nitric oxide,NO)분비수평급T-bet대소서백혈병세포L1210적살상활성.결과:재체pcDNA3.0-mT-bet구건성공병재Raw264.7세포중표체;T-bet대Raw264.7세포주기몰유영향(P＞0.05);경T-bet수식후,세포표면MHC Ⅰ류분자적표체(24.8±0.6)고우공재체조(20.8±0.7),유통계학의의(P＜0.05);단량조간MHCⅡ류분자적표체무현저성차이(P＞0.05).T-bet수식조탄서Dextran적평균형광강도(32.8±0.8)고우공재체조(28.2±0.4),유통계학의의(P＜0.05).재무지다당(lipopolysaccharide,LPS)자격시,T-bet조NO적산생량[(1.7±0.6)pmol]고우공재체조,량조상비차이유현저성(P＜0.05);경10 μg/ml LPS지속자격20 h후,T-bet조NO적산생량[(15.6±±1.6)pmol]현저고우공재체조[(10.5±1.3)pmol](P＜0.05).pcDNA3.0-mT-bet대L1210세포적체외살상활성[(51.9±3.5)%]명현고우공재체조[(35.6±2.1)%],차이유현저성(P＜0.05).결론:T-bet가유도Raw264.7세포표체MHC Ⅰ류분자,증강기대Dextran적탄서능력,촉진기분비NO,증가기대L1210세포적살상활성,단대기세포주기급MHCⅡ류분자적표체무영향.