吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2008年
3期
411-414
,共4页
徐松柏%赵刚%赵红光%许侃%于洪泉%夏常丽%康淑红
徐鬆柏%趙剛%趙紅光%許侃%于洪泉%夏常麗%康淑紅
서송백%조강%조홍광%허간%우홍천%하상려%강숙홍
RNAi%垂体肿瘤转化基因%神经胶质瘤%siRNA
RNAi%垂體腫瘤轉化基因%神經膠質瘤%siRNA
RNAi%수체종류전화기인%신경효질류%siRNA
目的:构建针对人脑胶质瘤细胞系U251的高效率沉默垂体瘤转化基因(PTTG)的小分子干扰RNA(siRNA)表达载体.方法:合成特异性干扰PTTG的siRNA片段,并与pGenesi12载体连接,构建PTTG干扰载体(pGenesi12-PTTG siRNA).利用脂质体将其转染U251细胞,分为正常细胞对照组、HK阴性对照组和3个siRNA干扰组(pGenesi12-PTTG siRNA1、pGenesi12-PTTG siRNA2和pGenesi12-PTTG siRNA3),应用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和流式细胞术对转染后U251细胞中PTTG的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果:酶切证实PTTG-siRNA表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;转染pGenesi12-PTTG siRNA后,3个干扰组的U251细胞中PTTG基因和蛋白表达水平均较正常对照组显著降低(P<0.01).结论:成功构建了能高效率沉默PTTG的RNAi表达载体;pGenesi12-PTTG siRNA高效地抑制了胶质瘤U251细胞中PTTG基因的表达.
目的:構建針對人腦膠質瘤細胞繫U251的高效率沉默垂體瘤轉化基因(PTTG)的小分子榦擾RNA(siRNA)錶達載體.方法:閤成特異性榦擾PTTG的siRNA片段,併與pGenesi12載體連接,構建PTTG榦擾載體(pGenesi12-PTTG siRNA).利用脂質體將其轉染U251細胞,分為正常細胞對照組、HK陰性對照組和3箇siRNA榦擾組(pGenesi12-PTTG siRNA1、pGenesi12-PTTG siRNA2和pGenesi12-PTTG siRNA3),應用半定量逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)法和流式細胞術對轉染後U251細胞中PTTG的mRNA和蛋白錶達水平進行分析.結果:酶切證實PTTG-siRNA錶達載體構建成功,插入片段測序結果與閤成的siRNA結果一緻;轉染pGenesi12-PTTG siRNA後,3箇榦擾組的U251細胞中PTTG基因和蛋白錶達水平均較正常對照組顯著降低(P<0.01).結論:成功構建瞭能高效率沉默PTTG的RNAi錶達載體;pGenesi12-PTTG siRNA高效地抑製瞭膠質瘤U251細胞中PTTG基因的錶達.
목적:구건침대인뇌효질류세포계U251적고효솔침묵수체류전화기인(PTTG)적소분자간우RNA(siRNA)표체재체.방법:합성특이성간우PTTG적siRNA편단,병여pGenesi12재체련접,구건PTTG간우재체(pGenesi12-PTTG siRNA).이용지질체장기전염U251세포,분위정상세포대조조、HK음성대조조화3개siRNA간우조(pGenesi12-PTTG siRNA1、pGenesi12-PTTG siRNA2화pGenesi12-PTTG siRNA3),응용반정량역전록취합매련식반응(RT-PCR)법화류식세포술대전염후U251세포중PTTG적mRNA화단백표체수평진행분석.결과:매절증실PTTG-siRNA표체재체구건성공,삽입편단측서결과여합성적siRNA결과일치;전염pGenesi12-PTTG siRNA후,3개간우조적U251세포중PTTG기인화단백표체수평균교정상대조조현저강저(P<0.01).결론:성공구건료능고효솔침묵PTTG적RNAi표체재체;pGenesi12-PTTG siRNA고효지억제료효질류U251세포중PTTG기인적표체.
