中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
6期
484-486
,共3页
王桂玲%陈薇%姜佩佳%王孝会
王桂玲%陳薇%薑珮佳%王孝會
왕계령%진미%강패가%왕효회
CCAAT增强子结合蛋白α%截短突变体%质粒%原核表达
CCAAT增彊子結閤蛋白α%截短突變體%質粒%原覈錶達
CCAAT증강자결합단백α%절단돌변체%질립%원핵표체
目的 构建GST-C/EBPa融合蛋白表达载体,并在大肠埃希茵(E.coli)中诱导表达.方法 以质粒pcDNA3.1-C/EBPa为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化E-coliDH5α筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定.结果 酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPa全长及各个截短突变体融合蛋白的表达.结论 成功构建了C/EBPa原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPa蛋白和研究C/EBPa的生物学功能奠定了基础.
目的 構建GST-C/EBPa融閤蛋白錶達載體,併在大腸埃希茵(E.coli)中誘導錶達.方法 以質粒pcDNA3.1-C/EBPa為模闆,用PCR法擴增C/EBPα全長及各箇截短片段,通過EcoRI和XhoI酶切位點將C/EBPα全長及各箇截短突變體定嚮插入pGEX-5X-1中,構建原覈錶達質粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突變體,併轉化E-coliDH5α篩選暘性重組子,限製性內切酶酶切鑒定和DNA序列測定正確後,轉入E.coli BL21中,異丙基硫代β-D半乳糖苷誘導錶達,SDS-PAGE和SDS-PAGE鑒定.結果 酶切及測序結果證明,成功構建瞭原覈錶達質粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突變體,併用SDS-PAGE方法證實瞭GST-C/EBPa全長及各箇截短突變體融閤蛋白的錶達.結論 成功構建瞭C/EBPa原覈錶達載體及其截短突變體,併證實瞭融閤蛋白的錶達,為進一步純化C/EBPa蛋白和研究C/EBPa的生物學功能奠定瞭基礎.
목적 구건GST-C/EBPa융합단백표체재체,병재대장애희인(E.coli)중유도표체.방법 이질립pcDNA3.1-C/EBPa위모판,용PCR법확증C/EBPα전장급각개절단편단,통과EcoRI화XhoI매절위점장C/EBPα전장급각개절단돌변체정향삽입pGEX-5X-1중,구건원핵표체질립pGEX-5X-1-C/EBPα급기절단돌변체,병전화E-coliDH5α사선양성중조자,한제성내절매매절감정화DNA서렬측정정학후,전입E.coli BL21중,이병기류대β-D반유당감유도표체,SDS-PAGE화SDS-PAGE감정.결과 매절급측서결과증명,성공구건료원핵표체질립pGEX-5X-1-C/EBPα급기절단돌변체,병용SDS-PAGE방법증실료GST-C/EBPa전장급각개절단돌변체융합단백적표체.결론 성공구건료C/EBPa원핵표체재체급기절단돌변체,병증실료융합단백적표체,위진일보순화C/EBPa단백화연구C/EBPa적생물학공능전정료기출.
