华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2011年
6期
629-633,655
,共6页
孙婧%赵霞%陈素华%艾继辉
孫婧%趙霞%陳素華%艾繼輝
손청%조하%진소화%애계휘
血管性血友病因子裂解酶%突变体%剪切力%流动小室
血管性血友病因子裂解酶%突變體%剪切力%流動小室
혈관성혈우병인자렬해매%돌변체%전절력%류동소실
目的 研究ADAMTS13及其突变体于体外流动状态下裂解血管性血友病因子(VWF),降低血小板粘附形成血栓能力的差异.方法 将全长ADAMTS13(FL)及缺失TSP2-8CUB1+2(MDTCS)和缺失CUB1+2(delCUB)cDNA质粒瞬时转染COS7细胞,Western blot检测各瞬时表达细胞分泌的蛋白.利用流体力学装置平板流动小室(Flow Chamber)培养人脐静脉内皮细胞,并通过蠕动泵加压流动培养液模拟人体血管内流动状态,荧光显微镜观测加入ADAMTS13或其突变体蛋白后荧光标记的血小板聚集状态的差异.结果 成功在真核表达细胞内瞬时表达ADAMTS13及其突变体蛋白,简单纯化并经Western blot检测各表达蛋白相对分子量与预期一致.Flow Chamber模拟人体血管内剪切力作用下,FL蛋白和MDTCS蛋白可以不同程度地抑制血小板凝集,delCUB蛋白抑制血小板凝集的能力显著下降.结论 成功瞬时表达全长ADAMTS13及其突变体蛋白.初步证实流动状态下ADAMTS13羧基端是参与裂解VWF以抑制血小板凝集的主要区域.
目的 研究ADAMTS13及其突變體于體外流動狀態下裂解血管性血友病因子(VWF),降低血小闆粘附形成血栓能力的差異.方法 將全長ADAMTS13(FL)及缺失TSP2-8CUB1+2(MDTCS)和缺失CUB1+2(delCUB)cDNA質粒瞬時轉染COS7細胞,Western blot檢測各瞬時錶達細胞分泌的蛋白.利用流體力學裝置平闆流動小室(Flow Chamber)培養人臍靜脈內皮細胞,併通過蠕動泵加壓流動培養液模擬人體血管內流動狀態,熒光顯微鏡觀測加入ADAMTS13或其突變體蛋白後熒光標記的血小闆聚集狀態的差異.結果 成功在真覈錶達細胞內瞬時錶達ADAMTS13及其突變體蛋白,簡單純化併經Western blot檢測各錶達蛋白相對分子量與預期一緻.Flow Chamber模擬人體血管內剪切力作用下,FL蛋白和MDTCS蛋白可以不同程度地抑製血小闆凝集,delCUB蛋白抑製血小闆凝集的能力顯著下降.結論 成功瞬時錶達全長ADAMTS13及其突變體蛋白.初步證實流動狀態下ADAMTS13羧基耑是參與裂解VWF以抑製血小闆凝集的主要區域.
목적 연구ADAMTS13급기돌변체우체외류동상태하렬해혈관성혈우병인자(VWF),강저혈소판점부형성혈전능력적차이.방법 장전장ADAMTS13(FL)급결실TSP2-8CUB1+2(MDTCS)화결실CUB1+2(delCUB)cDNA질립순시전염COS7세포,Western blot검측각순시표체세포분비적단백.이용류체역학장치평판류동소실(Flow Chamber)배양인제정맥내피세포,병통과연동빙가압류동배양액모의인체혈관내류동상태,형광현미경관측가입ADAMTS13혹기돌변체단백후형광표기적혈소판취집상태적차이.결과 성공재진핵표체세포내순시표체ADAMTS13급기돌변체단백,간단순화병경Western blot검측각표체단백상대분자량여예기일치.Flow Chamber모의인체혈관내전절력작용하,FL단백화MDTCS단백가이불동정도지억제혈소판응집,delCUB단백억제혈소판응집적능력현저하강.결론 성공순시표체전장ADAMTS13급기돌변체단백.초보증실류동상태하ADAMTS13최기단시삼여렬해VWF이억제혈소판응집적주요구역.
