中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2012年
1期
1-4
,共4页
黄天明%赵飞兰%莫发荣%晁耐霞%谢小薰%罗国容
黃天明%趙飛蘭%莫髮榮%晁耐霞%謝小薰%囉國容
황천명%조비란%막발영%조내하%사소훈%라국용
肿瘤相关抗原%kinectin%重组蛋白%诱导%树突状细胞
腫瘤相關抗原%kinectin%重組蛋白%誘導%樹突狀細胞
종류상관항원%kinectin%중조단백%유도%수돌상세포
目的 优化重组kinectin蛋白的诱导表达及纯化条件;探讨用其致敏的树突状细胞(DC)对自体T淋巴细胞增殖能力的影响.方法 以pMAL-C2为载体构建重组质粒,并转入TB1宿主菌.从IPTG加入时机、诱导温度、诱导时间及IPTG浓度方面对工程菌的诱导条件进行优化;过Amylose-resin亲和层析柱对诱导产物进行分离纯化.用获取的MBP-kinectin融合蛋白致敏从人外周血中分离培养的DC,并用ELISA检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法检测致敏DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力.结果 工程菌在37℃振荡培养2个小时后加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,降低温度到34℃继续诱导3个小时,可明显提高诱导效率;所得MBP-kinectin与DC共培养上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,均高于麦芽糖结合蛋白(MBP)组和空白对照组,且差异有统计学意义.结论 pMAL-C2载体可用于构建kinectin重组质粒;通过对诱导条件的优化,可获得较高的诱导效率;所得MBP-kinectin融合蛋白能致敏DC并具有很强的刺激自体T淋巴细胞增殖的能力.
目的 優化重組kinectin蛋白的誘導錶達及純化條件;探討用其緻敏的樹突狀細胞(DC)對自體T淋巴細胞增殖能力的影響.方法 以pMAL-C2為載體構建重組質粒,併轉入TB1宿主菌.從IPTG加入時機、誘導溫度、誘導時間及IPTG濃度方麵對工程菌的誘導條件進行優化;過Amylose-resin親和層析柱對誘導產物進行分離純化.用穫取的MBP-kinectin融閤蛋白緻敏從人外週血中分離培養的DC,併用ELISA檢測細胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法檢測緻敏DC刺激自體T淋巴細胞增殖的能力.結果 工程菌在37℃振盪培養2箇小時後加入終濃度為0.5 mmol/L的IPTG,降低溫度到34℃繼續誘導3箇小時,可明顯提高誘導效率;所得MBP-kinectin與DC共培養上清液中IL-12、IFN-γ含量分彆為(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴細胞增殖指數為53.14±0.62,均高于麥芽糖結閤蛋白(MBP)組和空白對照組,且差異有統計學意義.結論 pMAL-C2載體可用于構建kinectin重組質粒;通過對誘導條件的優化,可穫得較高的誘導效率;所得MBP-kinectin融閤蛋白能緻敏DC併具有很彊的刺激自體T淋巴細胞增殖的能力.
목적 우화중조kinectin단백적유도표체급순화조건;탐토용기치민적수돌상세포(DC)대자체T림파세포증식능력적영향.방법 이pMAL-C2위재체구건중조질립,병전입TB1숙주균.종IPTG가입시궤、유도온도、유도시간급IPTG농도방면대공정균적유도조건진행우화;과Amylose-resin친화층석주대유도산물진행분리순화.용획취적MBP-kinectin융합단백치민종인외주혈중분리배양적DC,병용ELISA검측세포상청액중적IL-12、IFN-γ함량;재용MTT법검측치민DC자격자체T림파세포증식적능력.결과 공정균재37℃진탕배양2개소시후가입종농도위0.5 mmol/L적IPTG,강저온도도34℃계속유도3개소시,가명현제고유도효솔;소득MBP-kinectin여DC공배양상청액중IL-12、IFN-γ함량분별위(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,용기자격적T림파세포증식지수위53.14±0.62,균고우맥아당결합단백(MBP)조화공백대조조,차차이유통계학의의.결론 pMAL-C2재체가용우구건kinectin중조질립;통과대유도조건적우화,가획득교고적유도효솔;소득MBP-kinectin융합단백능치민DC병구유흔강적자격자체T림파세포증식적능력.
