厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2012年
1期
101-106
,共6页
史莹飞%敬科举%凌雪萍%卢英华
史瑩飛%敬科舉%凌雪萍%盧英華
사형비%경과거%릉설평%로영화
胰岛素原%基因改造%高拷贝%毕赤酵母
胰島素原%基因改造%高拷貝%畢赤酵母
이도소원%기인개조%고고패%필적효모
依据毕赤酵母偏好密码子,设计合成长效人胰岛素原( human proinsulin,HPI)基因序列,所合成的HPI基因全长为200 bp,并在其N端添加信号肽(EEAEAEAEPK)以提高目的蛋白表达.将改造后基因克隆到pPIC9K载体中,构建分泌表达型载体pPIC9K-HPI,转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中.用遗传霉素G418梯度筛选获得高拷贝菌株,在甲醇诱导下表达分子质量为7.87 ku的HPI,利用金属螯合层析纯化蛋白质,胰蛋白酶酶切后利用人胰岛素试剂盒测得生物活性,HPI摇瓶最高产量可达35.4mg/L.该研究为获得大量长效胰岛素基因工程产品奠定研究基础.
依據畢赤酵母偏好密碼子,設計閤成長效人胰島素原( human proinsulin,HPI)基因序列,所閤成的HPI基因全長為200 bp,併在其N耑添加信號肽(EEAEAEAEPK)以提高目的蛋白錶達.將改造後基因剋隆到pPIC9K載體中,構建分泌錶達型載體pPIC9K-HPI,轉化到畢赤酵母(Pichia pastoris)GS115中.用遺傳黴素G418梯度篩選穫得高拷貝菌株,在甲醇誘導下錶達分子質量為7.87 ku的HPI,利用金屬螯閤層析純化蛋白質,胰蛋白酶酶切後利用人胰島素試劑盒測得生物活性,HPI搖瓶最高產量可達35.4mg/L.該研究為穫得大量長效胰島素基因工程產品奠定研究基礎.
의거필적효모편호밀마자,설계합성장효인이도소원( human proinsulin,HPI)기인서렬,소합성적HPI기인전장위200 bp,병재기N단첨가신호태(EEAEAEAEPK)이제고목적단백표체.장개조후기인극륭도pPIC9K재체중,구건분비표체형재체pPIC9K-HPI,전화도필적효모(Pichia pastoris)GS115중.용유전매소G418제도사선획득고고패균주,재갑순유도하표체분자질량위7.87 ku적HPI,이용금속오합층석순화단백질,이단백매매절후이용인이도소시제합측득생물활성,HPI요병최고산량가체35.4mg/L.해연구위획득대량장효이도소기인공정산품전정연구기출.
