小鼠FasL基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达
소서FasL기인진핵표체재체적구건급재HEK293세포중적표체
Construction of the eukaryotic expression vector of mouse FasL gene and its expression in HEK293 cells
  • 万方数据
    解剖学研究 해부학연구
    ANATOMY RESEARCH
    2012年 3期 180-184 ,共5页

    何霞%汪杨%何善阳%王铸%冯发深%关琳琳%罗燕芬%潘金成%曹开源%徐霖

    하하%왕양%하선양%왕주%풍발심%관림림%라연분%반금성%조개원%서림

    Fas Ligand%基因转染%稳定表达%HEK293细胞 Fas Ligand%基因轉染%穩定錶達%HEK293細胞
    Fas Ligand%기인전염%은정표체%HEK293세포
    目的 构建含有小鼠Fas Ligand (FasL)基因的重组真核表达载体,并检测FasL蛋白在其稳定转染的HEK293细胞中的表达情况,为构建表达小鼠Fas L的树突状细胞(DC)模型,深入研究DC联合T细胞防治移植物抗宿主病(GVHD)的新方法奠定基础.方法 从小鼠脾脏中提取RNA并逆转录为cDNA,以该cDNA为模板扩增FasL基因,插入pcDNA3.1(+)载体中构建pcDNA3.1(+)-FasL重组质粒,利用脂质体将其转染HEK293细胞,用G418筛选稳定表达细胞系,Western blot确定重组蛋白的表达.结果 通过酶切及测序证实FasL序列正确插入表达载体pcDNA3.1(+),Westemblot检测证实转染重组质粒的细胞能正确表达FasL蛋白,G418筛选后能够得到稳定表达FasL的抗性细胞株即FasL-HEK293.结论 重组质粒pcDNA3.1(+)-FasL和稳定表达FasL的HEK 293细胞成功构建,为后续FasL-DC细胞的研究打下了坚实基础.
    목적 구건함유소서Fas Ligand (FasL)기인적중조진핵표체재체,병검측FasL단백재기은정전염적HEK293세포중적표체정황,위구건표체소서Fas L적수돌상세포(DC)모형,심입연구DC연합T세포방치이식물항숙주병(GVHD)적신방법전정기출.방법 종소서비장중제취RNA병역전록위cDNA,이해cDNA위모판확증FasL기인,삽입pcDNA3.1(+)재체중구건pcDNA3.1(+)-FasL중조질립,이용지질체장기전염HEK293세포,용G418사선은정표체세포계,Western blot학정중조단백적표체.결과 통과매절급측서증실FasL서렬정학삽입표체재체pcDNA3.1(+),Westemblot검측증실전염중조질립적세포능정학표체FasL단백,G418사선후능구득도은정표체FasL적항성세포주즉FasL-HEK293.결론 중조질립pcDNA3.1(+)-FasL화은정표체FasL적HEK 293세포성공구건,위후속FasL-DC세포적연구타하료견실기출.
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