中国医药指南
中國醫藥指南
중국의약지남
CHINA MEDICINE GUIDE
2012年
21期
84-86
,共3页
张海栋%张锦前%王琦%刘顺爱%成军%赵龙凤%贾因棠
張海棟%張錦前%王琦%劉順愛%成軍%趙龍鳳%賈因棠
장해동%장금전%왕기%류순애%성군%조룡봉%가인당
丙型肝炎病毒%NS3%凋亡
丙型肝炎病毒%NS3%凋亡
병형간염병독%NS3%조망
目的 构建1b 型HCV-NS3 基因真核表达载体,转染HepG2 细胞并做表达谱基因芯片,筛选其影响肝癌细胞凋亡的差异表达基因,为进一步研究HCVNS3 致病的分子生物学机制准备了条件.方法 采集1b 型HCV 感染患者血清,提取HCV RNA,PCR 获得HCV-NS3编码片段,经T-A 克隆,构建pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3,用pcDNA3.1(-) 及上述重组载体的转染级质粒瞬时转染HepG2 细胞,用蛋白免疫印迹检测,同时提取细胞总RNA,进行人类全基因组表达谱测定.结果 从1b 型HCV 感染患者血清RNA 中扩增出的1893bp 片段大小正确,双酶切凝胶电泳结果 证明已将此片段克隆到pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3 内,经测序证明其碱基序列为编码目的 基因的正确序列,转染HepG2 细胞后蛋白免疫印迹证实;芯片结果 显示凋亡相关基因2 个上调,3 个下调.结论 成功地构建了1b 型HCV NS3 基因的真核表达载体pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3;HCV-NS3 可能是通过对FAIM2、FADD、TNFRSF4、FASLG 和TNF 基因的调控影响细胞凋亡.
目的 構建1b 型HCV-NS3 基因真覈錶達載體,轉染HepG2 細胞併做錶達譜基因芯片,篩選其影響肝癌細胞凋亡的差異錶達基因,為進一步研究HCVNS3 緻病的分子生物學機製準備瞭條件.方法 採集1b 型HCV 感染患者血清,提取HCV RNA,PCR 穫得HCV-NS3編碼片段,經T-A 剋隆,構建pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3,用pcDNA3.1(-) 及上述重組載體的轉染級質粒瞬時轉染HepG2 細胞,用蛋白免疫印跡檢測,同時提取細胞總RNA,進行人類全基因組錶達譜測定.結果 從1b 型HCV 感染患者血清RNA 中擴增齣的1893bp 片段大小正確,雙酶切凝膠電泳結果 證明已將此片段剋隆到pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3 內,經測序證明其堿基序列為編碼目的 基因的正確序列,轉染HepG2 細胞後蛋白免疫印跡證實;芯片結果 顯示凋亡相關基因2 箇上調,3 箇下調.結論 成功地構建瞭1b 型HCV NS3 基因的真覈錶達載體pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3;HCV-NS3 可能是通過對FAIM2、FADD、TNFRSF4、FASLG 和TNF 基因的調控影響細胞凋亡.
목적 구건1b 형HCV-NS3 기인진핵표체재체,전염HepG2 세포병주표체보기인심편,사선기영향간암세포조망적차이표체기인,위진일보연구HCVNS3 치병적분자생물학궤제준비료조건.방법 채집1b 형HCV 감염환자혈청,제취HCV RNA,PCR 획득HCV-NS3편마편단,경T-A 극륭,구건pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3,용pcDNA3.1(-) 급상술중조재체적전염급질립순시전염HepG2 세포,용단백면역인적검측,동시제취세포총RNA,진행인류전기인조표체보측정.결과 종1b 형HCV 감염환자혈청RNA 중확증출적1893bp 편단대소정학,쌍매절응효전영결과 증명이장차편단극륭도pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3 내,경측서증명기감기서렬위편마목적 기인적정학서렬,전염HepG2 세포후단백면역인적증실;심편결과 현시조망상관기인2 개상조,3 개하조.결론 성공지구건료1b 형HCV NS3 기인적진핵표체재체pcDNA3.1-myc-His(-)-NS3;HCV-NS3 가능시통과대FAIM2、FADD、TNFRSF4、FASLG 화TNF 기인적조공영향세포조망.
