安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2012年
6期
641-644
,共4页
张文晓%秦宜德%何晓光%郑欣%任明强
張文曉%秦宜德%何曉光%鄭訢%任明彊
장문효%진의덕%하효광%정흔%임명강
乳铁蛋白抗菌肽%免疫调节肽%融合蛋白%纯化%亲和层析
乳鐵蛋白抗菌肽%免疫調節肽%融閤蛋白%純化%親和層析
유철단백항균태%면역조절태%융합단백%순화%친화층석
目的 构建乳铁蛋白抗菌-免疫调节融合肽(LIFP)表达载体,在E.coli BL21中诱导高表达并进行纯化.方法 以乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与乳源免疫调节肽(PGPIPN)的序列为参照,以连接臂(GGGGS)连接两种肽,设计LIFP基因,并在其5′端设计凝血酶FXa识别的酶切位点.将融合肽基因构建到表达载体pGEX-KG中,转化到E.coli BL21中,用IPTG低温诱导表达,通过AKTA层析系统纯化融合蛋白,Western blot进行鉴定.结果 成功构建pGEX-KG-LIFP原核表达载体,并诱导其高表达.通过AKTA蛋白纯化系统,用亲和层析方法纯化,得到高纯度的融合蛋白.结论 成功构建了LIFP表达载体,制备并纯化了LIFP,为进一步研究该肽功能和药物开发奠定基础.
目的 構建乳鐵蛋白抗菌-免疫調節融閤肽(LIFP)錶達載體,在E.coli BL21中誘導高錶達併進行純化.方法 以乳鐵蛋白抗菌肽(LfcinB)與乳源免疫調節肽(PGPIPN)的序列為參照,以連接臂(GGGGS)連接兩種肽,設計LIFP基因,併在其5′耑設計凝血酶FXa識彆的酶切位點.將融閤肽基因構建到錶達載體pGEX-KG中,轉化到E.coli BL21中,用IPTG低溫誘導錶達,通過AKTA層析繫統純化融閤蛋白,Western blot進行鑒定.結果 成功構建pGEX-KG-LIFP原覈錶達載體,併誘導其高錶達.通過AKTA蛋白純化繫統,用親和層析方法純化,得到高純度的融閤蛋白.結論 成功構建瞭LIFP錶達載體,製備併純化瞭LIFP,為進一步研究該肽功能和藥物開髮奠定基礎.
목적 구건유철단백항균-면역조절융합태(LIFP)표체재체,재E.coli BL21중유도고표체병진행순화.방법 이유철단백항균태(LfcinB)여유원면역조절태(PGPIPN)적서렬위삼조,이련접비(GGGGS)련접량충태,설계LIFP기인,병재기5′단설계응혈매FXa식별적매절위점.장융합태기인구건도표체재체pGEX-KG중,전화도E.coli BL21중,용IPTG저온유도표체,통과AKTA층석계통순화융합단백,Western blot진행감정.결과 성공구건pGEX-KG-LIFP원핵표체재체,병유도기고표체.통과AKTA단백순화계통,용친화층석방법순화,득도고순도적융합단백.결론 성공구건료LIFP표체재체,제비병순화료LIFP,위진일보연구해태공능화약물개발전정기출.
