华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2012年
1期
30-34
,共5页
于翠梅%张志宏%刘月学%马跃%李贺%代红艳
于翠梅%張誌宏%劉月學%馬躍%李賀%代紅豔
우취매%장지굉%류월학%마약%리하%대홍염
草莓轻型黄边病毒%外壳蛋白基因%原核表达
草莓輕型黃邊病毒%外殼蛋白基因%原覈錶達
초매경형황변병독%외각단백기인%원핵표체
克隆草莓轻型黄边病毒CP基因,并构建其原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达CP蛋白.利用SMYEV的检测引物,通过RT-PCR技术筛选带SMYEV的草莓植株；根据NCBI中SMYEV序列设计扩增CP基因全长引物,通过RT-PCR获得SMYEV沈阳分离物CP基因全长序列；将CP基因克隆到原核表达pGEX-6P-1上,利用IPTG诱导CP基因在大肠杆菌BL21( DE3)中表达蛋白.利用RT-PCR扩增获得SMYEV分离物SY05的CP基因全长序列,由729个核苷酸组成,编码242个氨基酸残基.SY05与其他SMYEV分离物的核苷酸同源性为80.1％～97.4％,氨基酸同源性为92.1％～99.6％,其中,与SMYEV分离物SY03的氨基酸一致性为98.3％.将SY05的CP基因成功克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,构建了重组表达载体p6P-EV-CP,并将其导入大肠杆菌BL21( DE3)中.SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导SMYEV分离物SY05的CP基因在大肠杆菌中表达出分子量为52.0 kDa的融合蛋白.克隆出SMYEV分离物SY05的CP基因,实现了其在原核细胞中的表达,为SMYEV抗血清的制备奠定了重要基础.
剋隆草莓輕型黃邊病毒CP基因,併構建其原覈錶達載體,在大腸桿菌中誘導錶達CP蛋白.利用SMYEV的檢測引物,通過RT-PCR技術篩選帶SMYEV的草莓植株；根據NCBI中SMYEV序列設計擴增CP基因全長引物,通過RT-PCR穫得SMYEV瀋暘分離物CP基因全長序列；將CP基因剋隆到原覈錶達pGEX-6P-1上,利用IPTG誘導CP基因在大腸桿菌BL21( DE3)中錶達蛋白.利用RT-PCR擴增穫得SMYEV分離物SY05的CP基因全長序列,由729箇覈苷痠組成,編碼242箇氨基痠殘基.SY05與其他SMYEV分離物的覈苷痠同源性為80.1％～97.4％,氨基痠同源性為92.1％～99.6％,其中,與SMYEV分離物SY03的氨基痠一緻性為98.3％.將SY05的CP基因成功剋隆到原覈錶達載體pGEX-6P-1上,構建瞭重組錶達載體p6P-EV-CP,併將其導入大腸桿菌BL21( DE3)中.SDS-PAGE分析錶明,IPTG誘導SMYEV分離物SY05的CP基因在大腸桿菌中錶達齣分子量為52.0 kDa的融閤蛋白.剋隆齣SMYEV分離物SY05的CP基因,實現瞭其在原覈細胞中的錶達,為SMYEV抗血清的製備奠定瞭重要基礎.
극륭초매경형황변병독CP기인,병구건기원핵표체재체,재대장간균중유도표체CP단백.이용SMYEV적검측인물,통과RT-PCR기술사선대SMYEV적초매식주；근거NCBI중SMYEV서렬설계확증CP기인전장인물,통과RT-PCR획득SMYEV침양분리물CP기인전장서렬；장CP기인극륭도원핵표체pGEX-6P-1상,이용IPTG유도CP기인재대장간균BL21( DE3)중표체단백.이용RT-PCR확증획득SMYEV분리물SY05적CP기인전장서렬,유729개핵감산조성,편마242개안기산잔기.SY05여기타SMYEV분리물적핵감산동원성위80.1％～97.4％,안기산동원성위92.1％～99.6％,기중,여SMYEV분리물SY03적안기산일치성위98.3％.장SY05적CP기인성공극륭도원핵표체재체pGEX-6P-1상,구건료중조표체재체p6P-EV-CP,병장기도입대장간균BL21( DE3)중.SDS-PAGE분석표명,IPTG유도SMYEV분리물SY05적CP기인재대장간균중표체출분자량위52.0 kDa적융합단백.극륭출SMYEV분리물SY05적CP기인,실현료기재원핵세포중적표체,위SMYEV항혈청적제비전정료중요기출.
