CAJ | 학술논문

本研究通过建立磷酸特异化流式细胞术(phospho-specific flow cytometry,phospho-flow)检测白血病细胞信号通路磷酸化蛋白的实验方法,探讨Phospho-flow在白血病研究中的应用价值.取白血病患儿的骨髓,分别采用Phospho-flow单个核细胞法和Phospho-flow直接固定法进行处理.Phospho-flow单个核细胞法为:骨髓经提取单个核细胞并固定破膜处理后,加入磷酸化抗体( P-AKT,P-ERK1/2)孵育,然后用流式细胞仪分析；Phospho-flow骨髓直接固定法为:骨髓经固定/裂解液和90％甲醇破膜细胞处理,然后加入细胞表面CD抗体及P-AKT,P-ERK1/2孵育,然后上流式细胞仪分析处理.结果表明,26例白血病患儿骨髓经phospho-flow单个核细胞法处理,P-AKT和P-ERK1/2阳性率分别为46.2％和30.8％,经phospho-flow骨髓直接固定法处理,P-AKT和P-ERK1/2阳性率分别为50.0％和38.5％.经统计学分析,两种phospho-flow的骨髓处理方法在检测P-AKT和P-ERK1/2的阳性率方面无统计学差异(p＞0.05).结论:本实验室建立的phospho-flow骨髓直接固定法,能有效检测白血病患儿骨髓细胞的磷酸化蛋白,可用于白血病信号通路的实验研究.
본연구통과건립린산특이화류식세포술(phospho-specific flow cytometry,phospho-flow)검측백혈병세포신호통로린산화단백적실험방법,탐토Phospho-flow재백혈병연구중적응용개치.취백혈병환인적골수,분별채용Phospho-flow단개핵세포법화Phospho-flow직접고정법진행처리.Phospho-flow단개핵세포법위:골수경제취단개핵세포병고정파막처리후,가입린산화항체( P-AKT,P-ERK1/2)부육,연후용류식세포의분석；Phospho-flow골수직접고정법위:골수경고정/렬해액화90％갑순파막세포처리,연후가입세포표면CD항체급P-AKT,P-ERK1/2부육,연후상류식세포의분석처리.결과표명,26례백혈병환인골수경phospho-flow단개핵세포법처리,P-AKT화P-ERK1/2양성솔분별위46.2％화30.8％,경phospho-flow골수직접고정법처리,P-AKT화P-ERK1/2양성솔분별위50.0％화38.5％.경통계학분석,량충phospho-flow적골수처리방법재검측P-AKT화P-ERK1/2적양성솔방면무통계학차이(p＞0.05).결론:본실험실건립적phospho-flow골수직접고정법,능유효검측백혈병환인골수세포적린산화단백,가용우백혈병신호통로적실험연구.