生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
9期
199-204
,共6页
李晓玲%李克秀%赵洪锟%赵茂林%董英山
李曉玲%李剋秀%趙洪錕%趙茂林%董英山
리효령%리극수%조홍곤%조무림%동영산
可转化人工染色体(TAC)%文库载体%酶切%脱磷
可轉化人工染色體(TAC)%文庫載體%酶切%脫燐
가전화인공염색체(TAC)%문고재체%매절%탈린
对可转化人工染色体(TAC)pYLTAC747NH/sacB文库载体DNA的制备条件进行了较系统的模索和研究.结果表明,该文库载体经碱裂解法提取、QIAGEN Plasmid Mini kit纯化后,可获得较纯净的载体DNA.对其闭环载体DNA分别用不同酶量的Hinid Ⅲ酶切处理,经琼脂糖凝胶电泳检测得出其最佳Hind Ⅲ完全酶切条件为2 U Hind Ⅲ/μg闭环载体DNA、37℃酶切30 min;分别用0.5 MBU和1 MBU HK脱磷酶/μg对其线性载体DNA进行脱磷处理,经电泳和载体自连产物电转化检测表明其适宜的完全脱磷条件为1 MBU HK脱磷酶/μg线性载体DNA,30℃脱磷1 h；将所制备的线性载体DNA与λ DNA/Hind Ⅲ酶切片段进行连接,连接产物转化频率较高,其电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞频率可达到9.6×10s.
對可轉化人工染色體(TAC)pYLTAC747NH/sacB文庫載體DNA的製備條件進行瞭較繫統的模索和研究.結果錶明,該文庫載體經堿裂解法提取、QIAGEN Plasmid Mini kit純化後,可穫得較純淨的載體DNA.對其閉環載體DNA分彆用不同酶量的Hinid Ⅲ酶切處理,經瓊脂糖凝膠電泳檢測得齣其最佳Hind Ⅲ完全酶切條件為2 U Hind Ⅲ/μg閉環載體DNA、37℃酶切30 min;分彆用0.5 MBU和1 MBU HK脫燐酶/μg對其線性載體DNA進行脫燐處理,經電泳和載體自連產物電轉化檢測錶明其適宜的完全脫燐條件為1 MBU HK脫燐酶/μg線性載體DNA,30℃脫燐1 h；將所製備的線性載體DNA與λ DNA/Hind Ⅲ酶切片段進行連接,連接產物轉化頻率較高,其電轉化大腸桿菌DH10B感受態細胞頻率可達到9.6×10s.
대가전화인공염색체(TAC)pYLTAC747NH/sacB문고재체DNA적제비조건진행료교계통적모색화연구.결과표명,해문고재체경감렬해법제취、QIAGEN Plasmid Mini kit순화후,가획득교순정적재체DNA.대기폐배재체DNA분별용불동매량적Hinid Ⅲ매절처리,경경지당응효전영검측득출기최가Hind Ⅲ완전매절조건위2 U Hind Ⅲ/μg폐배재체DNA、37℃매절30 min;분별용0.5 MBU화1 MBU HK탈린매/μg대기선성재체DNA진행탈린처리,경전영화재체자련산물전전화검측표명기괄의적완전탈린조건위1 MBU HK탈린매/μg선성재체DNA,30℃탈린1 h；장소제비적선성재체DNA여λ DNA/Hind Ⅲ매절편단진행련접,련접산물전화빈솔교고,기전전화대장간균DH10B감수태세포빈솔가체도9.6×10s.
