重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2011年
35期
3548-3550
,共3页
癌,肝细胞%5′非翻译区%肽链延伸,翻译%RNA稳定性%骨桥蛋白
癌,肝細胞%5′非翻譯區%肽鏈延伸,翻譯%RNA穩定性%骨橋蛋白
암,간세포%5′비번역구%태련연신,번역%RNA은정성%골교단백
目的 分离鉴定在肝癌细胞HepG2 和Hep3B中与骨桥蛋白(OPN)5′非翻译区(5′-UTR)结合后在转录后水平调节OPN mRNA的稳定性的mRNA结合蛋白.方法 利用亲和纯化的方法分离和纯化OPN 5′ UTR结合蛋白,质谱分析消化后的片段以鉴定蛋白;Hep3B细胞瞬时转染真核细胞翻译延长因子 1A(EF1A) siRNA抑制EF1A,HepG2细胞瞬时转染(pcDNA 3.1+EF1A)质粒过表达EF1A,Western blot检测OPN蛋白的表达,real-time PCR 检测OPN mRNA半衰期的变化.结果 质谱分析法确认此结合蛋白为EF1A.在HepG2细胞中过表达EF1A能通过加速OPN mRNA的降解而降低OPN表达;在Hep3B细胞中利用siRNA技术下调EF1A的表达能增强OPN mRNA的稳定性,进而增强OPN的表达.结论 EF1A作为一个去稳定因素作用于OPN 5′UTR,至少部分决定了Hep3B和HepG2细胞中OPN的表达.
目的 分離鑒定在肝癌細胞HepG2 和Hep3B中與骨橋蛋白(OPN)5′非翻譯區(5′-UTR)結閤後在轉錄後水平調節OPN mRNA的穩定性的mRNA結閤蛋白.方法 利用親和純化的方法分離和純化OPN 5′ UTR結閤蛋白,質譜分析消化後的片段以鑒定蛋白;Hep3B細胞瞬時轉染真覈細胞翻譯延長因子 1A(EF1A) siRNA抑製EF1A,HepG2細胞瞬時轉染(pcDNA 3.1+EF1A)質粒過錶達EF1A,Western blot檢測OPN蛋白的錶達,real-time PCR 檢測OPN mRNA半衰期的變化.結果 質譜分析法確認此結閤蛋白為EF1A.在HepG2細胞中過錶達EF1A能通過加速OPN mRNA的降解而降低OPN錶達;在Hep3B細胞中利用siRNA技術下調EF1A的錶達能增彊OPN mRNA的穩定性,進而增彊OPN的錶達.結論 EF1A作為一箇去穩定因素作用于OPN 5′UTR,至少部分決定瞭Hep3B和HepG2細胞中OPN的錶達.
목적 분리감정재간암세포HepG2 화Hep3B중여골교단백(OPN)5′비번역구(5′-UTR)결합후재전록후수평조절OPN mRNA적은정성적mRNA결합단백.방법 이용친화순화적방법분리화순화OPN 5′ UTR결합단백,질보분석소화후적편단이감정단백;Hep3B세포순시전염진핵세포번역연장인자 1A(EF1A) siRNA억제EF1A,HepG2세포순시전염(pcDNA 3.1+EF1A)질립과표체EF1A,Western blot검측OPN단백적표체,real-time PCR 검측OPN mRNA반쇠기적변화.결과 질보분석법학인차결합단백위EF1A.재HepG2세포중과표체EF1A능통과가속OPN mRNA적강해이강저OPN표체;재Hep3B세포중이용siRNA기술하조EF1A적표체능증강OPN mRNA적은정성,진이증강OPN적표체.결론 EF1A작위일개거은정인소작용우OPN 5′UTR,지소부분결정료Hep3B화HepG2세포중OPN적표체.
