中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2009年
11期
57-60
,共4页
伪狂犬病病毒%gK基因%真核表达
偽狂犬病病毒%gK基因%真覈錶達
위광견병병독%gK기인%진핵표체
以伪狂犬病毒Ea株Bam H I 5'片段为模板,PCR扩增出约0.9 kb gK基因完整编码区片段,将该基因克隆到pBluescriptIISK+中,构建重组载体pSKgK.进一步将该片段插入真核表达载体pEGFP-C1的增强绿荧光蛋白EGFP下游,构建真核表达载体pEGFPgK,脂质体法转染BHK-21细胞,G418筛选至正常细胞完全死亡,在倒置荧光显微镜下观察,pEGFPgK转染的细胞在细胞膜和细胞浆中发出很强的荧光,而正常细胞不发荧光.证明gK基因在BHK-21细胞上获得了表达,表达在细胞膜和细胞浆中.
以偽狂犬病毒Ea株Bam H I 5'片段為模闆,PCR擴增齣約0.9 kb gK基因完整編碼區片段,將該基因剋隆到pBluescriptIISK+中,構建重組載體pSKgK.進一步將該片段插入真覈錶達載體pEGFP-C1的增彊綠熒光蛋白EGFP下遊,構建真覈錶達載體pEGFPgK,脂質體法轉染BHK-21細胞,G418篩選至正常細胞完全死亡,在倒置熒光顯微鏡下觀察,pEGFPgK轉染的細胞在細胞膜和細胞漿中髮齣很彊的熒光,而正常細胞不髮熒光.證明gK基因在BHK-21細胞上穫得瞭錶達,錶達在細胞膜和細胞漿中.
이위광견병독Ea주Bam H I 5'편단위모판,PCR확증출약0.9 kb gK기인완정편마구편단,장해기인극륭도pBluescriptIISK+중,구건중조재체pSKgK.진일보장해편단삽입진핵표체재체pEGFP-C1적증강록형광단백EGFP하유,구건진핵표체재체pEGFPgK,지질체법전염BHK-21세포,G418사선지정상세포완전사망,재도치형광현미경하관찰,pEGFPgK전염적세포재세포막화세포장중발출흔강적형광,이정상세포불발형광.증명gK기인재BHK-21세포상획득료표체,표체재세포막화세포장중.
