新疆农业科学
新疆農業科學
신강농업과학
XINJIANG AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
3期
561-566
,共6页
马春春%张祥林%乾义柯%王翀
馬春春%張祥林%乾義柯%王翀
마춘춘%장상림%건의가%왕충
植原体%PCR%巢式PCR%体系优化
植原體%PCR%巢式PCR%體繫優化
식원체%PCR%소식PCR%체계우화
用已报道的植原体通用引物对葡萄黄化病和枣疯病植原体进行常规PCR及巢式PCR检测,并对PCR反应体系进行优化.结果表明:常规PCR扩增出了1.5 kb的特异片段,所需PCR模板DNA用量为20 ng/μL;在PCR基础上的巢式 PCR扩增出1.2 kb的特异片段,所需PCR模板DNA用量为2 pg/μL.检测灵敏度提高约10 000倍.优化试验表明:25 μL反应体系中,MgCl2用量对扩增效果影响最大.最终最佳反应体系确立为:25 mM MgCl21.7 μL,2.5 mM dNTP 1.8 μL,5U/μL Taq酶可选用0.2 μL,10mM引物对各0.2 μL,最佳退火温度为45.0℃.
用已報道的植原體通用引物對葡萄黃化病和棘瘋病植原體進行常規PCR及巢式PCR檢測,併對PCR反應體繫進行優化.結果錶明:常規PCR擴增齣瞭1.5 kb的特異片段,所需PCR模闆DNA用量為20 ng/μL;在PCR基礎上的巢式 PCR擴增齣1.2 kb的特異片段,所需PCR模闆DNA用量為2 pg/μL.檢測靈敏度提高約10 000倍.優化試驗錶明:25 μL反應體繫中,MgCl2用量對擴增效果影響最大.最終最佳反應體繫確立為:25 mM MgCl21.7 μL,2.5 mM dNTP 1.8 μL,5U/μL Taq酶可選用0.2 μL,10mM引物對各0.2 μL,最佳退火溫度為45.0℃.
용이보도적식원체통용인물대포도황화병화조풍병식원체진행상규PCR급소식PCR검측,병대PCR반응체계진행우화.결과표명:상규PCR확증출료1.5 kb적특이편단,소수PCR모판DNA용량위20 ng/μL;재PCR기출상적소식 PCR확증출1.2 kb적특이편단,소수PCR모판DNA용량위2 pg/μL.검측령민도제고약10 000배.우화시험표명:25 μL반응체계중,MgCl2용량대확증효과영향최대.최종최가반응체계학립위:25 mM MgCl21.7 μL,2.5 mM dNTP 1.8 μL,5U/μL Taq매가선용0.2 μL,10mM인물대각0.2 μL,최가퇴화온도위45.0℃.
