郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
3期
513-516
,共4页
郭玉霞%金先庆%罗庆%郑改焕%于洁%刘筱梅%温贤浩%徐酉华
郭玉霞%金先慶%囉慶%鄭改煥%于潔%劉篠梅%溫賢浩%徐酉華
곽옥하%금선경%라경%정개환%우길%류소매%온현호%서유화
耐药相关基因HA117%腺病毒%K562细胞
耐藥相關基因HA117%腺病毒%K562細胞
내약상관기인HA117%선병독%K562세포
目的:构建携带耐药相关基因HA117的高滴度重组腺病毒,转染K562细胞,检测其在K562细胞中的表达情况.方法:用基因工程技术将ATRA相关耐药新基因HA117的cDNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,然后在细菌内与pAdeasy同源重组,后将重组腺病毒Adeasy-HA117经脂质体转染包装细胞HEK293,并收获原代的重组腺病毒Adeasy-HA117,经乒乓交互感染的方法扩增原代腺病毒,应用RT-PCR、荧光显微镜及流式细胞仪鉴定和检测重组腺病毒感染K562细胞后HA117的表达情况.结果:酶切罄定及PCR结果证明ATRA相关耐药新基因HA117重组腺病毒载体构建成功.携带新基因HA117重组腺病毒载体的效价达8.3×1011pfu/mL.RT-PCR检测到转染后K562细胞内HA117的表达.结论:成功获得携带新基因HA117的重组腺病毒,并能使其在K562细胞巾高表达.
目的:構建攜帶耐藥相關基因HA117的高滴度重組腺病毒,轉染K562細胞,檢測其在K562細胞中的錶達情況.方法:用基因工程技術將ATRA相關耐藥新基因HA117的cDNA亞剋隆至穿梭質粒pAdTrack-CMV上,然後在細菌內與pAdeasy同源重組,後將重組腺病毒Adeasy-HA117經脂質體轉染包裝細胞HEK293,併收穫原代的重組腺病毒Adeasy-HA117,經乒乓交互感染的方法擴增原代腺病毒,應用RT-PCR、熒光顯微鏡及流式細胞儀鑒定和檢測重組腺病毒感染K562細胞後HA117的錶達情況.結果:酶切罄定及PCR結果證明ATRA相關耐藥新基因HA117重組腺病毒載體構建成功.攜帶新基因HA117重組腺病毒載體的效價達8.3×1011pfu/mL.RT-PCR檢測到轉染後K562細胞內HA117的錶達.結論:成功穫得攜帶新基因HA117的重組腺病毒,併能使其在K562細胞巾高錶達.
목적:구건휴대내약상관기인HA117적고적도중조선병독,전염K562세포,검측기재K562세포중적표체정황.방법:용기인공정기술장ATRA상관내약신기인HA117적cDNA아극륭지천사질립pAdTrack-CMV상,연후재세균내여pAdeasy동원중조,후장중조선병독Adeasy-HA117경지질체전염포장세포HEK293,병수획원대적중조선병독Adeasy-HA117,경핑퐁교호감염적방법확증원대선병독,응용RT-PCR、형광현미경급류식세포의감정화검측중조선병독감염K562세포후HA117적표체정황.결과:매절경정급PCR결과증명ATRA상관내약신기인HA117중조선병독재체구건성공.휴대신기인HA117중조선병독재체적효개체8.3×1011pfu/mL.RT-PCR검측도전염후K562세포내HA117적표체.결론:성공획득휴대신기인HA117적중조선병독,병능사기재K562세포건고표체.
