CAJ | 학술논문

[目的]在基因工程菌中实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7基因的高效表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其免疫学活性及应用价值.[方法]将已构建好的重组表达载体pET-ORF7转化大肠杆菌BL21 (DE3) ,用IPTG在最适条件下诱导表达,其表达产物用SDS-PAGE和Western Blot进行检测.应用Ni-NTA His·Bind(R) Resin层析柱在变性条件下纯化表达产物,通过梯度透析进行复性.采用Western Blot及间接ELISA法检测复性后重组蛋白的免疫学活性.[结果]重组质粒 pET-ORF7在大肠杆菌中以融合形式成功表达,融合表达产物主要以包涵体形式存在.SDS-PAGE检测所表达的重组蛋白分子量为33 kD左右,与预期大小相符.Bandscan软件对表达蛋白分析发现,表达产物约占菌体蛋白的50%.Western Blot及间接ELISA法显示复性后的重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应,表明其具有良好的免疫学活性.[结论]该试验将为进一步研制PRRSV单克隆抗体及诊断试剂盒奠定基础.
[목적]재기인공정균중실현저번식여호흡종합정병독(PRRSV)ORF7기인적고효표체,대표체적중조단백진행순화,병탐토기면역학활성급응용개치.[방법]장이구건호적중조표체재체pET-ORF7전화대장간균BL21 (DE3) ,용IPTG재최괄조건하유도표체,기표체산물용SDS-PAGE화Western Blot진행검측.응용Ni-NTA His·Bind(R) Resin층석주재변성조건하순화표체산물,통과제도투석진행복성.채용Western Blot급간접ELISA법검측복성후중조단백적면역학활성.[결과]중조질립 pET-ORF7재대장간균중이융합형식성공표체,융합표체산물주요이포함체형식존재.SDS-PAGE검측소표체적중조단백분자량위33 kD좌우,여예기대소상부.Bandscan연건대표체단백분석발현,표체산물약점균체단백적50%.Western Blot급간접ELISA법현시복성후적중조단백여PRRSV양성혈청유특이성결합반응,표명기구유량호적면역학활성.[결론]해시험장위진일보연제PRRSV단극륭항체급진단시제합전정기출.