中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2008年
11期
1003-1008
,共6页
徐贤坤%熊毅%龙剑明%刘棋%曾宪垠
徐賢坤%熊毅%龍劍明%劉棋%曾憲垠
서현곤%웅의%룡검명%류기%증헌은
γ-干扰素成熟蛋白基因%大肠杆菌表达系统%水牛%多克隆抗体%BALB/c小鼠
γ-榦擾素成熟蛋白基因%大腸桿菌錶達繫統%水牛%多剋隆抗體%BALB/c小鼠
γ-간우소성숙단백기인%대장간균표체계통%수우%다극륭항체%BALB/c소서
将水牛γ-干扰素成熟蛋白(IFN-γ)基因亚克隆至pGEX-6P-1中,成功构建了pGEX-BoIFN-γ表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)重组菌进行IPTG诱导表达.应用SDS-PAGE方法对表达产物rGST-BoIFN-γ进行分析,用GST琼脂糖凝胶柱对可溶性蛋白进行分离纯化,并采用ELISA和Western-blot试验鉴定重组蛋白的免疫活性.将可溶性纯化蛋白作为抗原免疫小鼠,包涵体蛋白经SDS-PAGE分析后切取目的蛋白免疫小鼠以制备多克隆抗体.结果表明:重组菌经37℃0.5 mmol/L的IPTG诱导3 h,表达出43 ku的融合蛋白.目的蛋白的表达量达到菌体总蛋白量的30%,分别以可溶性和包涵体两种形式存在,而可溶性表达蛋白纯化后的纯度较高.获得的重组蛋白具有良好的免疫活性.均能从可溶性蛋白及包涵体蛋白免疫小鼠得到针对rGST-BoIFN-γ的特异性多克隆抗体.
將水牛γ-榦擾素成熟蛋白(IFN-γ)基因亞剋隆至pGEX-6P-1中,成功構建瞭pGEX-BoIFN-γ錶達載體,轉化至大腸桿菌BL21(DE3)重組菌進行IPTG誘導錶達.應用SDS-PAGE方法對錶達產物rGST-BoIFN-γ進行分析,用GST瓊脂糖凝膠柱對可溶性蛋白進行分離純化,併採用ELISA和Western-blot試驗鑒定重組蛋白的免疫活性.將可溶性純化蛋白作為抗原免疫小鼠,包涵體蛋白經SDS-PAGE分析後切取目的蛋白免疫小鼠以製備多剋隆抗體.結果錶明:重組菌經37℃0.5 mmol/L的IPTG誘導3 h,錶達齣43 ku的融閤蛋白.目的蛋白的錶達量達到菌體總蛋白量的30%,分彆以可溶性和包涵體兩種形式存在,而可溶性錶達蛋白純化後的純度較高.穫得的重組蛋白具有良好的免疫活性.均能從可溶性蛋白及包涵體蛋白免疫小鼠得到針對rGST-BoIFN-γ的特異性多剋隆抗體.
장수우γ-간우소성숙단백(IFN-γ)기인아극륭지pGEX-6P-1중,성공구건료pGEX-BoIFN-γ표체재체,전화지대장간균BL21(DE3)중조균진행IPTG유도표체.응용SDS-PAGE방법대표체산물rGST-BoIFN-γ진행분석,용GST경지당응효주대가용성단백진행분리순화,병채용ELISA화Western-blot시험감정중조단백적면역활성.장가용성순화단백작위항원면역소서,포함체단백경SDS-PAGE분석후절취목적단백면역소서이제비다극륭항체.결과표명:중조균경37℃0.5 mmol/L적IPTG유도3 h,표체출43 ku적융합단백.목적단백적표체량체도균체총단백량적30%,분별이가용성화포함체량충형식존재,이가용성표체단백순화후적순도교고.획득적중조단백구유량호적면역활성.균능종가용성단백급포함체단백면역소서득도침대rGST-BoIFN-γ적특이성다극륭항체.
