应用预防医学
應用預防醫學
응용예방의학
JOURNAL OF APPLIED PREVENTIVE MEDICINE
2008年
5期
257-262
,共6页
林睿%黎学铭%赵同领%张鸿满%张陆娟%欧阳颐%江河
林睿%黎學銘%趙同領%張鴻滿%張陸娟%歐暘頤%江河
림예%려학명%조동령%장홍만%장륙연%구양이%강하
卡氏肺孢子虫%内转录问隔区(ITS)%5.8S核糖体RNA基因(5.8S rDNA)%巢式PCR
卡氏肺孢子蟲%內轉錄問隔區(ITS)%5.8S覈糖體RNA基因(5.8S rDNA)%巢式PCR
잡씨폐포자충%내전록문격구(ITS)%5.8S핵당체RNA기인(5.8S rDNA)%소식PCR
目的 探讨ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫的应用价值并测定其基因序列.方法 采用地塞米松免疫抑制法诱导SD大鼠感染肺孢子虫;制作肺印片、肺组织匀浆液及支气管肺泡灌洗液(BAL)涂片进行六亚甲基四胺银(GMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA进行巢式PCR扩增,测序后与GenBank的不同宿丰肺孢子虫相关序列进行比较分析.结果 用ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR法均能检测出实验感染大鼠BAL和肺组织卡氏肺孢子虫DNA,阳性率为100%(10/10),比较BAL标本、肺印片和肺组织匀浆液GMS染色法的检出效率,BAL最低,肺组织匀浆液最高.其中20%(2/10)大鼠的BAL标本用GMS染色法未能检测出,但用巢式PCR方法 均能成功扩增;所测SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度为516bp,ITS1、5.8S rDNA、ITS2基因片段分别为198、158、160bp,与GenBank的大鼠(L27658)、小鼠(AY532651)和长爪沙鼠(AY875972)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性分别为96%(452/467)、88%(275/310)、95%(152/159),其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR检测卡氏肺孢子虫敏感性高、特异性强,可作为早期诊断肺孢子虫肺炎方法,特别适用无创性标本的检测;成功获取SD大鼠卡氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基冈序列,与不同宿主比较其5.8S rDNA较保守,ITS1和ITS2基因变异较大,适合基因分型和系统进化研究.
目的 探討ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR檢測卡氏肺孢子蟲的應用價值併測定其基因序列.方法 採用地塞米鬆免疫抑製法誘導SD大鼠感染肺孢子蟲;製作肺印片、肺組織勻漿液及支氣管肺泡灌洗液(BAL)塗片進行六亞甲基四胺銀(GMS)染色鏡檢;提取肺孢子蟲DNA進行巢式PCR擴增,測序後與GenBank的不同宿豐肺孢子蟲相關序列進行比較分析.結果 用ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR法均能檢測齣實驗感染大鼠BAL和肺組織卡氏肺孢子蟲DNA,暘性率為100%(10/10),比較BAL標本、肺印片和肺組織勻漿液GMS染色法的檢齣效率,BAL最低,肺組織勻漿液最高.其中20%(2/10)大鼠的BAL標本用GMS染色法未能檢測齣,但用巢式PCR方法 均能成功擴增;所測SD大鼠卡氏肺孢子蟲ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列長度為516bp,ITS1、5.8S rDNA、ITS2基因片段分彆為198、158、160bp,與GenBank的大鼠(L27658)、小鼠(AY532651)和長爪沙鼠(AY875972)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性分彆為96%(452/467)、88%(275/310)、95%(152/159),其變異位點多在ITS1和ITS2基因片段.結論 ITS1-5.8S rDNA-ITS2巢式PCR檢測卡氏肺孢子蟲敏感性高、特異性彊,可作為早期診斷肺孢子蟲肺炎方法,特彆適用無創性標本的檢測;成功穫取SD大鼠卡氏肺孢子蟲ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基岡序列,與不同宿主比較其5.8S rDNA較保守,ITS1和ITS2基因變異較大,適閤基因分型和繫統進化研究.
목적 탐토ITS1-5.8S rDNA-ITS2소식PCR검측잡씨폐포자충적응용개치병측정기기인서렬.방법 채용지새미송면역억제법유도SD대서감염폐포자충;제작폐인편、폐조직균장액급지기관폐포관세액(BAL)도편진행륙아갑기사알은(GMS)염색경검;제취폐포자충DNA진행소식PCR확증,측서후여GenBank적불동숙봉폐포자충상관서렬진행비교분석.결과 용ITS1-5.8S rDNA-ITS2소식PCR법균능검측출실험감염대서BAL화폐조직잡씨폐포자충DNA,양성솔위100%(10/10),비교BAL표본、폐인편화폐조직균장액GMS염색법적검출효솔,BAL최저,폐조직균장액최고.기중20%(2/10)대서적BAL표본용GMS염색법미능검측출,단용소식PCR방법 균능성공확증;소측SD대서잡씨폐포자충ITS1-5.8S rDNA-ITS2기인서렬장도위516bp,ITS1、5.8S rDNA、ITS2기인편단분별위198、158、160bp,여GenBank적대서(L27658)、소서(AY532651)화장조사서(AY875972)적ITS1-5.8S rDNA-ITS2기인적동원성분별위96%(452/467)、88%(275/310)、95%(152/159),기변이위점다재ITS1화ITS2기인편단.결론 ITS1-5.8S rDNA-ITS2소식PCR검측잡씨폐포자충민감성고、특이성강,가작위조기진단폐포자충폐염방법,특별괄용무창성표본적검측;성공획취SD대서잡씨폐포자충ITS1-5.8S rDNA-ITS2적기강서렬,여불동숙주비교기5.8S rDNA교보수,ITS1화ITS2기인변이교대,괄합기인분형화계통진화연구.
