CAJ | 학술논문

目的:研究发现间充质干细胞具有独特的免疫调节特性,体外能够抑制混合淋巴细胞培养或有丝分裂原刺激中的T淋巴细胞增殖.实验观察体外分离培养的脐血间充质干细胞对异体外周血T淋巴细胞增殖的抑制效果.方法:实验于2004-10/2006-06在解放军兰州军区兰州总医院完成.①对象:足月正常分娩产妇脐血及健康志愿者外周血分别由解放军兰州军区兰州总医院妇产科、血液科提供,产妇与志愿者对实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准.②实验方法:Percoll法分离脐血单个核细胞,贴壁纯化,达80%～90%融合时胰蛋白酶消化,按2.0×108L-1密度传代,取第4-5代细胞用于实验.密度梯度法分离外周血单个核细胞,以含体积分数为0.2胎牛血清的RPMI 1640培养基调整细胞浓度至1×109 L-1时加入尼龙棉柱内,用培养基冲出非黏附细胞即为T淋巴细胞.脐血间充质干细胞分为2×108,1×108,0.5×108 L-1组,各100 μL接种于96孔培养板,加入2×108 L-1 T淋巴细胞悬液100 μL,再给予植物血凝素刺激T淋巴细胞转化.以T淋巴细胞+植物血凝素为阳性对照.③实验评估:观察体外培养的脐血间充质干细胞形态,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达.MTT法测定脐血间充质干细胞对异体外周血T淋巴细胞增殖的影响.结果:①形态特征与表面抗原表达:原代培养10～18 d形成平行排列、辐射状或旋涡状的成纤维样细胞,即为脐血源性的间充质干细胞,传代7 d左右细胞达90%融合.流式细胞仪检测90%细胞稳定表达间充质干细胞相关抗原CD13,CD29,CD44,CD166,不表达造血细胞系的表面抗原CD34,CD45.②脐血间充质干细胞对异体T淋巴细胞增殖的抑制:与阳性对照比较,经脐血间充质干细胞共培养后植物血凝素刺激T淋巴细胞的增殖作用受到抑制,增殖指数明显降低(P＜0.01).间充质干细胞与T淋巴细胞比值为1:1,1:2和1:4时的增殖抑制率分别为(48.16±2.31)%,(34.47±3.09)%,(22.15±2.63)%.结论:脐血间充质干细胞可显著抑制异体外周血T淋巴细胞的增殖,该抑制作用呈剂量依赖性. 目的:研究髮現間充質榦細胞具有獨特的免疫調節特性,體外能夠抑製混閤淋巴細胞培養或有絲分裂原刺激中的T淋巴細胞增殖.實驗觀察體外分離培養的臍血間充質榦細胞對異體外週血T淋巴細胞增殖的抑製效果.方法:實驗于2004-10/2006-06在解放軍蘭州軍區蘭州總醫院完成.①對象:足月正常分娩產婦臍血及健康誌願者外週血分彆由解放軍蘭州軍區蘭州總醫院婦產科、血液科提供,產婦與誌願者對實驗均籤署知情同意書,實驗經醫院醫學倫理委員會批準.②實驗方法:Percoll法分離臍血單箇覈細胞,貼壁純化,達80%～90%融閤時胰蛋白酶消化,按2.0×108L-1密度傳代,取第4-5代細胞用于實驗.密度梯度法分離外週血單箇覈細胞,以含體積分數為0.2胎牛血清的RPMI 1640培養基調整細胞濃度至1×109 L-1時加入尼龍棉柱內,用培養基遲齣非黏附細胞即為T淋巴細胞.臍血間充質榦細胞分為2×108,1×108,0.5×108 L-1組,各100 μL接種于96孔培養闆,加入2×108 L-1 T淋巴細胞懸液100 μL,再給予植物血凝素刺激T淋巴細胞轉化.以T淋巴細胞+植物血凝素為暘性對照.③實驗評估:觀察體外培養的臍血間充質榦細胞形態,應用流式細胞儀檢測細胞錶麵抗原的錶達.MTT法測定臍血間充質榦細胞對異體外週血T淋巴細胞增殖的影響.結果:①形態特徵與錶麵抗原錶達:原代培養10～18 d形成平行排列、輻射狀或鏇渦狀的成纖維樣細胞,即為臍血源性的間充質榦細胞,傳代7 d左右細胞達90%融閤.流式細胞儀檢測90%細胞穩定錶達間充質榦細胞相關抗原CD13,CD29,CD44,CD166,不錶達造血細胞繫的錶麵抗原CD34,CD45.②臍血間充質榦細胞對異體T淋巴細胞增殖的抑製:與暘性對照比較,經臍血間充質榦細胞共培養後植物血凝素刺激T淋巴細胞的增殖作用受到抑製,增殖指數明顯降低(P＜0.01).間充質榦細胞與T淋巴細胞比值為1:1,1:2和1:4時的增殖抑製率分彆為(48.16±2.31)%,(34.47±3.09)%,(22.15±2.63)%.結論:臍血間充質榦細胞可顯著抑製異體外週血T淋巴細胞的增殖,該抑製作用呈劑量依賴性.
목적:연구발현간충질간세포구유독특적면역조절특성,체외능구억제혼합림파세포배양혹유사분렬원자격중적T림파세포증식.실험관찰체외분리배양적제혈간충질간세포대이체외주혈T림파세포증식적억제효과.방법:실험우2004-10/2006-06재해방군란주군구란주총의원완성.①대상:족월정상분면산부제혈급건강지원자외주혈분별유해방군란주군구란주총의원부산과、혈액과제공,산부여지원자대실험균첨서지정동의서,실험경의원의학윤리위원회비준.②실험방법:Percoll법분리제혈단개핵세포,첩벽순화,체80%～90%융합시이단백매소화,안2.0×108L-1밀도전대,취제4-5대세포용우실험.밀도제도법분리외주혈단개핵세포,이함체적분수위0.2태우혈청적RPMI 1640배양기조정세포농도지1×109 L-1시가입니룡면주내,용배양기충출비점부세포즉위T림파세포.제혈간충질간세포분위2×108,1×108,0.5×108 L-1조,각100 μL접충우96공배양판,가입2×108 L-1 T림파세포현액100 μL,재급여식물혈응소자격T림파세포전화.이T림파세포+식물혈응소위양성대조.③실험평고:관찰체외배양적제혈간충질간세포형태,응용류식세포의검측세포표면항원적표체.MTT법측정제혈간충질간세포대이체외주혈T림파세포증식적영향.결과:①형태특정여표면항원표체:원대배양10～18 d형성평행배렬、복사상혹선와상적성섬유양세포,즉위제혈원성적간충질간세포,전대7 d좌우세포체90%융합.류식세포의검측90%세포은정표체간충질간세포상관항원CD13,CD29,CD44,CD166,불표체조혈세포계적표면항원CD34,CD45.②제혈간충질간세포대이체T림파세포증식적억제:여양성대조비교,경제혈간충질간세포공배양후식물혈응소자격T림파세포적증식작용수도억제,증식지수명현강저(P＜0.01).간충질간세포여T림파세포비치위1:1,1:2화1:4시적증식억제솔분별위(48.16±2.31)%,(34.47±3.09)%,(22.15±2.63)%.결론:제혈간충질간세포가현저억제이체외주혈T림파세포적증식,해억제작용정제량의뢰성.