CAJ | 학술논문

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提.Shotgun蛋白质组学研究通常采用二维液相色谱(强阳离子交换色谱-反相色谱)分离后接串联质谱检测的方法.但由于离子交换色谱体系中含有高浓度的盐,使得在线分析的难度较大;而在离线分析时,也常因需要对高盐组分进行脱盐处理而易引起样品损失.因此,该文尝试用pH梯度替代盐梯度,实现pH梯度-强阳离子交换色谱方法应用于复杂肽段混合物的分离.通过对缓冲体系pH值的计算,优化了乙酸-乙酸铵体系线性pH梯度配合盐梯度的离子交换色谱方法,以及柠檬酸-氨水体系线性pH梯度的离子交换色谱方法.将这两种方法应用于牛血清白蛋白酶切产物的分离取得了与常规强阳离子交换色谱相似的分离效果.乙酸-乙酸铵体系采用的是低浓度的可挥发性铵盐,采用真空冻干的方法可以有效除盐,基质辅助激光解吸质谱靶上自然挥发也可以达到较好的脱盐效果,简化了常规方法繁琐费时的脱盐步骤及避免了由此造成的样品损失.柠檬酸-氨水体系采用pH梯度洗脱替代盐梯度洗脱,大大降低了体系中的盐浓度.这两种方法在复杂体系蛋白质组研究的样本预分离中具有较好的应用前景.
복잡태단혼합물적유효분리시고복개솔지감정단백질혼합물적전제.Shotgun단백질조학연구통상채용이유액상색보(강양리자교환색보-반상색보)분리후접천련질보검측적방법.단유우리자교환색보체계중함유고농도적염,사득재선분석적난도교대;이재리선분석시,야상인수요대고염조분진행탈염처리이역인기양품손실.인차,해문상시용pH제도체대염제도,실현pH제도-강양리자교환색보방법응용우복잡태단혼합물적분리.통과대완충체계pH치적계산,우화료을산-을산안체계선성pH제도배합염제도적리자교환색보방법,이급저몽산-안수체계선성pH제도적리자교환색보방법.장저량충방법응용우우혈청백단백매절산물적분리취득료여상규강양리자교환색보상사적분리효과.을산-을산안체계채용적시저농도적가휘발성안염,채용진공동간적방법가이유효제염,기질보조격광해흡질보파상자연휘발야가이체도교호적탈염효과,간화료상규방법번쇄비시적탈염보취급피면료유차조성적양품손실.저몽산-안수체계채용pH제도세탈체대염제도세탈,대대강저료체계중적염농도.저량충방법재복잡체계단백질조연구적양본예분리중구유교호적응용전경.