中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2007年
11期
2262-2264
,共3页
孙爱华%宋春涵%吴森林%毛亚飞%周海鸥%严杰
孫愛華%宋春涵%吳森林%毛亞飛%週海鷗%嚴傑
손애화%송춘함%오삼림%모아비%주해구%엄걸
奈瑟球菌,淋病%基因,PIA%序列分析%原核表达
奈瑟毬菌,淋病%基因,PIA%序列分析%原覈錶達
내슬구균,임병%기인,PIA%서렬분석%원핵표체
目的:分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株外膜蛋白PIA基因核苷酸及氨基酸序列,构建PIA基因的原核表达系统.方法:采用高保真PCR扩增9株淋病奈瑟菌全长PIA基因序列,T-A克隆测序后与GenBank公布的序列进行同源性比较.构建PIA原核表达系统.采用不同浓度IPTG诱导重组目的蛋白rPIA表达,10%SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rPIA表达情况.采用Ni-NTA亲和层析法提纯rPIA,SDS-PAGE检测提纯效果.结果:与报道的PIA基因序列(GenBank No:L19962)比较,9株淋病奈瑟菌核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.6%-100%和99.1%-100%,均属于IA6血清型.rPIA表达量可占细菌总蛋白量的50.1%,提纯后仅显示单一的目的蛋白条带.结论:IA6为本地区淋病奈瑟菌优势血清型,该基因序列相当保守.所构建的PIA基因原核表达系统能高效表达rPIA,为今后研制淋病奈瑟菌血清学检测试剂盒及疫苗研制奠定了基础.
目的:分析本地區淋病奈瑟菌臨床菌株外膜蛋白PIA基因覈苷痠及氨基痠序列,構建PIA基因的原覈錶達繫統.方法:採用高保真PCR擴增9株淋病奈瑟菌全長PIA基因序列,T-A剋隆測序後與GenBank公佈的序列進行同源性比較.構建PIA原覈錶達繫統.採用不同濃度IPTG誘導重組目的蛋白rPIA錶達,10%SDS-PAGE和Bio-Rad凝膠圖像分析繫統檢測rPIA錶達情況.採用Ni-NTA親和層析法提純rPIA,SDS-PAGE檢測提純效果.結果:與報道的PIA基因序列(GenBank No:L19962)比較,9株淋病奈瑟菌覈苷痠和氨基痠序列相似性分彆高達99.6%-100%和99.1%-100%,均屬于IA6血清型.rPIA錶達量可佔細菌總蛋白量的50.1%,提純後僅顯示單一的目的蛋白條帶.結論:IA6為本地區淋病奈瑟菌優勢血清型,該基因序列相噹保守.所構建的PIA基因原覈錶達繫統能高效錶達rPIA,為今後研製淋病奈瑟菌血清學檢測試劑盒及疫苗研製奠定瞭基礎.
목적:분석본지구임병내슬균림상균주외막단백PIA기인핵감산급안기산서렬,구건PIA기인적원핵표체계통.방법:채용고보진PCR확증9주임병내슬균전장PIA기인서렬,T-A극륭측서후여GenBank공포적서렬진행동원성비교.구건PIA원핵표체계통.채용불동농도IPTG유도중조목적단백rPIA표체,10%SDS-PAGE화Bio-Rad응효도상분석계통검측rPIA표체정황.채용Ni-NTA친화층석법제순rPIA,SDS-PAGE검측제순효과.결과:여보도적PIA기인서렬(GenBank No:L19962)비교,9주임병내슬균핵감산화안기산서렬상사성분별고체99.6%-100%화99.1%-100%,균속우IA6혈청형.rPIA표체량가점세균총단백량적50.1%,제순후부현시단일적목적단백조대.결론:IA6위본지구임병내슬균우세혈청형,해기인서렬상당보수.소구건적PIA기인원핵표체계통능고효표체rPIA,위금후연제임병내슬균혈청학검측시제합급역묘연제전정료기출.
