生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
17-20
,共4页
祁喜涛%李国强%赵文亮%樊福好%李余良%胡建广
祁喜濤%李國彊%趙文亮%樊福好%李餘良%鬍建廣
기희도%리국강%조문량%번복호%리여량%호건엄
载体构建%猪瘟%种子特异表达
載體構建%豬瘟%種子特異錶達
재체구건%저온%충자특이표체
目的:克隆猪瘟病毒表面抗原E2基因,构建种子特异表达的载体,为在玉米种子内专一表达E2蛋白奠定基础.方法:终止序列NOS经中间载体pUC18插入植物表达载体pCAMBIA-1300的XbaⅠ与EcoRⅠ位点间,得重组质粒pCAMBIA-1300-NOS,命名为pCAMBIA-1300-NOS-bar;将1.4kb的种子特异表达启动子Globulin-1插入质粒pCR(R)2.1的Hind Ⅲ与BamH Ⅰ位点间,得重组质粒pCR-G;将1.1kb的E2基因插入质粒pBluescriptSK Ⅱ的Hind Ⅲ与BamH Ⅰ位点间,消除HindⅢ位点,得重组质粒pBluescriptSK Ⅱ-E2;用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ从pBluescriptSK Ⅱ-E2中分离E2,插入pCR-G的amH Ⅰ和Xho Ⅰ之间,得重组质粒pCR-G-E2;用HindⅢ和XbaⅠ从pCR-G-E2中分离2.5kb的片断,插入载体pCAMBIA-1300-NOS-bar中,得玉米种子特异表达载体pCAMBIA-1300-GEN.结果:对重组质粒pCAMBIA-1300-GEN经酶切、测序鉴定正确无误.结论:成功构建了种子特异表达载体并将其导入根癌农杆菌LBA4404,为在种子内特异表达猪瘟主要抗原蛋白的转基因植物新品种奠定了基础.
目的:剋隆豬瘟病毒錶麵抗原E2基因,構建種子特異錶達的載體,為在玉米種子內專一錶達E2蛋白奠定基礎.方法:終止序列NOS經中間載體pUC18插入植物錶達載體pCAMBIA-1300的XbaⅠ與EcoRⅠ位點間,得重組質粒pCAMBIA-1300-NOS,命名為pCAMBIA-1300-NOS-bar;將1.4kb的種子特異錶達啟動子Globulin-1插入質粒pCR(R)2.1的Hind Ⅲ與BamH Ⅰ位點間,得重組質粒pCR-G;將1.1kb的E2基因插入質粒pBluescriptSK Ⅱ的Hind Ⅲ與BamH Ⅰ位點間,消除HindⅢ位點,得重組質粒pBluescriptSK Ⅱ-E2;用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ從pBluescriptSK Ⅱ-E2中分離E2,插入pCR-G的amH Ⅰ和Xho Ⅰ之間,得重組質粒pCR-G-E2;用HindⅢ和XbaⅠ從pCR-G-E2中分離2.5kb的片斷,插入載體pCAMBIA-1300-NOS-bar中,得玉米種子特異錶達載體pCAMBIA-1300-GEN.結果:對重組質粒pCAMBIA-1300-GEN經酶切、測序鑒定正確無誤.結論:成功構建瞭種子特異錶達載體併將其導入根癌農桿菌LBA4404,為在種子內特異錶達豬瘟主要抗原蛋白的轉基因植物新品種奠定瞭基礎.
목적:극륭저온병독표면항원E2기인,구건충자특이표체적재체,위재옥미충자내전일표체E2단백전정기출.방법:종지서렬NOS경중간재체pUC18삽입식물표체재체pCAMBIA-1300적XbaⅠ여EcoRⅠ위점간,득중조질립pCAMBIA-1300-NOS,명명위pCAMBIA-1300-NOS-bar;장1.4kb적충자특이표체계동자Globulin-1삽입질립pCR(R)2.1적Hind Ⅲ여BamH Ⅰ위점간,득중조질립pCR-G;장1.1kb적E2기인삽입질립pBluescriptSK Ⅱ적Hind Ⅲ여BamH Ⅰ위점간,소제HindⅢ위점,득중조질립pBluescriptSK Ⅱ-E2;용BamH Ⅰ화Xho Ⅰ종pBluescriptSK Ⅱ-E2중분리E2,삽입pCR-G적amH Ⅰ화Xho Ⅰ지간,득중조질립pCR-G-E2;용HindⅢ화XbaⅠ종pCR-G-E2중분리2.5kb적편단,삽입재체pCAMBIA-1300-NOS-bar중,득옥미충자특이표체재체pCAMBIA-1300-GEN.결과:대중조질립pCAMBIA-1300-GEN경매절、측서감정정학무오.결론:성공구건료충자특이표체재체병장기도입근암농간균LBA4404,위재충자내특이표체저온주요항원단백적전기인식물신품충전정료기출.
