核农学报
覈農學報
핵농학보
ACTA AGRICULTURAE NUCLEATAE SINICA
2007年
5期
461-465
,共5页
草莓%抗菌肽D基因%载体构建%遗传转化
草莓%抗菌肽D基因%載體構建%遺傳轉化
초매%항균태D기인%재체구건%유전전화
将构建的携带NPTⅡ和AP-D基因的植物表达载体pBI121导入根癌农杆菌EH105中后,用其对草莓主栽品种丰香叶盘进行遗传转化,探讨了卡那霉素(Kan)的浓度、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间和筛选方式等因素对转化率的影响.结果表明:丰香草莓适宜的转化条件是Kan筛选浓度为20 mg/L,预培养时间为2～3 d,菌液浓度OD600 0.3～0.5,侵染时间10～20 min;共培养2～3 d后将外植体接到含有5 mg/L Kan和500 mg/L Carb的诱导培养基上进行培养,以后每次继代逐步提高Kan选择压力至终浓度20 mg/L(每次增加5 mg/L);或共培养2～3 d后将外植体接到含有500 mg/L Carb的诱导培养基上,培养2周后继代到含20 mg/L Kan和400 mg/L Carb的培养基上进行选择培养.根据PCR检测结果,抗性愈伤组织转化率高达18.5%.抗性愈伤组织经进一步诱导,最后获得了17株抗性植株.本文探讨了影响丰香草莓转化的多个因素,以期建立高效的遗传转化体系,为草莓属植物种质的遗传转化奠定基础.
將構建的攜帶NPTⅡ和AP-D基因的植物錶達載體pBI121導入根癌農桿菌EH105中後,用其對草莓主栽品種豐香葉盤進行遺傳轉化,探討瞭卡那黴素(Kan)的濃度、菌液濃度、侵染時間、預培養時間、共培養時間和篩選方式等因素對轉化率的影響.結果錶明:豐香草莓適宜的轉化條件是Kan篩選濃度為20 mg/L,預培養時間為2～3 d,菌液濃度OD600 0.3～0.5,侵染時間10～20 min;共培養2～3 d後將外植體接到含有5 mg/L Kan和500 mg/L Carb的誘導培養基上進行培養,以後每次繼代逐步提高Kan選擇壓力至終濃度20 mg/L(每次增加5 mg/L);或共培養2～3 d後將外植體接到含有500 mg/L Carb的誘導培養基上,培養2週後繼代到含20 mg/L Kan和400 mg/L Carb的培養基上進行選擇培養.根據PCR檢測結果,抗性愈傷組織轉化率高達18.5%.抗性愈傷組織經進一步誘導,最後穫得瞭17株抗性植株.本文探討瞭影響豐香草莓轉化的多箇因素,以期建立高效的遺傳轉化體繫,為草莓屬植物種質的遺傳轉化奠定基礎.
장구건적휴대NPTⅡ화AP-D기인적식물표체재체pBI121도입근암농간균EH105중후,용기대초매주재품충봉향협반진행유전전화,탐토료잡나매소(Kan)적농도、균액농도、침염시간、예배양시간、공배양시간화사선방식등인소대전화솔적영향.결과표명:봉향초매괄의적전화조건시Kan사선농도위20 mg/L,예배양시간위2～3 d,균액농도OD600 0.3～0.5,침염시간10～20 min;공배양2～3 d후장외식체접도함유5 mg/L Kan화500 mg/L Carb적유도배양기상진행배양,이후매차계대축보제고Kan선택압력지종농도20 mg/L(매차증가5 mg/L);혹공배양2～3 d후장외식체접도함유500 mg/L Carb적유도배양기상,배양2주후계대도함20 mg/L Kan화400 mg/L Carb적배양기상진행선택배양.근거PCR검측결과,항성유상조직전화솔고체18.5%.항성유상조직경진일보유도,최후획득료17주항성식주.본문탐토료영향봉향초매전화적다개인소,이기건립고효적유전전화체계,위초매속식물충질적유전전화전정기출.
