中国热带医学
中國熱帶醫學
중국열대의학
CHINA TROPICAL MEDICINE
2007年
8期
1289-1290,1339
,共3页
谭光宏%王才春%黄风迎%王华%黄用豪%林映莹%宿静梅
譚光宏%王纔春%黃風迎%王華%黃用豪%林映瑩%宿靜梅
담광굉%왕재춘%황풍영%왕화%황용호%림영형%숙정매
白细胞介素-5%真核表达%质粒%基因工程
白細胞介素-5%真覈錶達%質粒%基因工程
백세포개소-5%진핵표체%질립%기인공정
目的 构建小鼠白细胞介素-5(IL-5)基因真核表达质粒,了解该质粒在真核细胞COS细胞中有效表达情况.方法 以含有小鼠IL-5基因的克隆质粒pORF9-mIL-5为模板,通过PCR扩增小鼠IL-5全段基因,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入peDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-m IL-5,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染COS细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质.结果 成功扩增了小鼠IL-5全长基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-m IL-5,Westem blot方法证实该质粒能在COS真核细胞中有效表达小鼠IL-5目的蛋白.结论 成功构建了小鼠IL-5基因的真核表达质粒载体,为进一步研究IL-5的新功能和免疫基因治疗奠定了基础.
目的 構建小鼠白細胞介素-5(IL-5)基因真覈錶達質粒,瞭解該質粒在真覈細胞COS細胞中有效錶達情況.方法 以含有小鼠IL-5基因的剋隆質粒pORF9-mIL-5為模闆,通過PCR擴增小鼠IL-5全段基因,應用基因工程技術將擴增的基因片段插入peDNA3.1(+)真覈錶達質粒,構建重組真覈錶達質粒pcDNA-m IL-5,經限製性內切酶酶切分析及測序鑒定正確後,用脂質體轉染技術轉染COS細胞,用Western Blot鑒定該質粒是否能夠在真覈細胞中錶達相應的目的蛋白質.結果 成功擴增瞭小鼠IL-5全長基因,酶切和測序證明正確構建瞭重組真覈錶達質粒pcDNA-m IL-5,Westem blot方法證實該質粒能在COS真覈細胞中有效錶達小鼠IL-5目的蛋白.結論 成功構建瞭小鼠IL-5基因的真覈錶達質粒載體,為進一步研究IL-5的新功能和免疫基因治療奠定瞭基礎.
목적 구건소서백세포개소-5(IL-5)기인진핵표체질립,료해해질립재진핵세포COS세포중유효표체정황.방법 이함유소서IL-5기인적극륭질립pORF9-mIL-5위모판,통과PCR확증소서IL-5전단기인,응용기인공정기술장확증적기인편단삽입peDNA3.1(+)진핵표체질립,구건중조진핵표체질립pcDNA-m IL-5,경한제성내절매매절분석급측서감정정학후,용지질체전염기술전염COS세포,용Western Blot감정해질립시부능구재진핵세포중표체상응적목적단백질.결과 성공확증료소서IL-5전장기인,매절화측서증명정학구건료중조진핵표체질립pcDNA-m IL-5,Westem blot방법증실해질립능재COS진핵세포중유효표체소서IL-5목적단백.결론 성공구건료소서IL-5기인적진핵표체질립재체,위진일보연구IL-5적신공능화면역기인치료전정료기출.
