CAJ | 학술논문

目的:寻找脐带血来源的间充质干细胞体外分离、纯化及培养的条件,以建立稳定的体外培养体系,满足实验和临床的需要.方法:实验于2005-06/2006-04在青岛大学医学院附属医院儿科研究所完成.脐带血36份,50～60 mL/份,取自青岛大学医学院附属医院产科健康产妇正常足月顺产或剖宫产分娩婴儿的脐带血,经产妇本人及家属同意.无菌条件下取正常足月剖宫产胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞.16份脐血每份分为3组,分别以间充质干细胞接种密度1×107L-1、1×109 L-1、1×1011 L-1接种于未包被6孔培养板内,加入5%胎牛血清的DMEM-LG培养.20份脐血每份分为3组,以1×1011L-1单个核细胞密度分别加入5%、10%和20%胎牛血清的DMEM-LG接种于胎牛血清包被的6孔培养板内培养.采用常规的间充质干细胞培养Friedenstein法进行脐血间充质干细胞的培养和扩增培养.观察不同脐血单个核细胞的接种密度、培养液胎牛血清浓度和胎牛血清包被培养皿对间充质干细胞培养的影响.结果:①胎牛血清未包被组以1×107L-1和1×109L-1接种组培养7 d后贴壁数量很少,贴壁的细胞未长满瓶底即死亡,无法传代.1×1011L-1组贴壁细胞较多,间充质样细胞与破骨样细胞并存.1×1011L-1组分5%、10%、20%3种血清浓度,贴壁细胞均较多,以间充质干细胞为主,胎牛血清浓度5%组间充质干细胞的纯度较10%及20%组高,破骨样细胞相对较少;胎牛血清包被组与未包被组相比,贴壁细胞少,培养的间充质干细胞纯度较高,破骨样细胞相对较少.②流式细胞仪检测脐血间充质干细胞的免疫表型,结果显示,脐血P3代间充质干细胞不表达或极弱表达CD34、CD45、CD106等造血细胞标志,稳定地高表达CD29、CD44、CD105等间充质细胞相关的表面抗原标记物.结论:将脐血单个核细胞以1×1011L-1高密度接种在5%低胎牛血清浓度的低糖DMEM培养基中、胎牛血清包被培养瓶等条件下,可以在体外成功的培养出较纯化的脐血间充质干细胞,其培养成功率和间充质干细胞纯度较高. 目的:尋找臍帶血來源的間充質榦細胞體外分離、純化及培養的條件,以建立穩定的體外培養體繫,滿足實驗和臨床的需要.方法:實驗于2005-06/2006-04在青島大學醫學院附屬醫院兒科研究所完成.臍帶血36份,50～60 mL/份,取自青島大學醫學院附屬醫院產科健康產婦正常足月順產或剖宮產分娩嬰兒的臍帶血,經產婦本人及傢屬同意.無菌條件下取正常足月剖宮產胎兒的臍帶血,經肝素抗凝,用淋巴細胞分離液分離臍血單箇覈細胞.16份臍血每份分為3組,分彆以間充質榦細胞接種密度1×107L-1、1×109 L-1、1×1011 L-1接種于未包被6孔培養闆內,加入5%胎牛血清的DMEM-LG培養.20份臍血每份分為3組,以1×1011L-1單箇覈細胞密度分彆加入5%、10%和20%胎牛血清的DMEM-LG接種于胎牛血清包被的6孔培養闆內培養.採用常規的間充質榦細胞培養Friedenstein法進行臍血間充質榦細胞的培養和擴增培養.觀察不同臍血單箇覈細胞的接種密度、培養液胎牛血清濃度和胎牛血清包被培養皿對間充質榦細胞培養的影響.結果:①胎牛血清未包被組以1×107L-1和1×109L-1接種組培養7 d後貼壁數量很少,貼壁的細胞未長滿瓶底即死亡,無法傳代.1×1011L-1組貼壁細胞較多,間充質樣細胞與破骨樣細胞併存.1×1011L-1組分5%、10%、20%3種血清濃度,貼壁細胞均較多,以間充質榦細胞為主,胎牛血清濃度5%組間充質榦細胞的純度較10%及20%組高,破骨樣細胞相對較少;胎牛血清包被組與未包被組相比,貼壁細胞少,培養的間充質榦細胞純度較高,破骨樣細胞相對較少.②流式細胞儀檢測臍血間充質榦細胞的免疫錶型,結果顯示,臍血P3代間充質榦細胞不錶達或極弱錶達CD34、CD45、CD106等造血細胞標誌,穩定地高錶達CD29、CD44、CD105等間充質細胞相關的錶麵抗原標記物.結論:將臍血單箇覈細胞以1×1011L-1高密度接種在5%低胎牛血清濃度的低糖DMEM培養基中、胎牛血清包被培養瓶等條件下,可以在體外成功的培養齣較純化的臍血間充質榦細胞,其培養成功率和間充質榦細胞純度較高.
목적:심조제대혈래원적간충질간세포체외분리、순화급배양적조건,이건립은정적체외배양체계,만족실험화림상적수요.방법:실험우2005-06/2006-04재청도대학의학원부속의원인과연구소완성.제대혈36빈,50～60 mL/빈,취자청도대학의학원부속의원산과건강산부정상족월순산혹부궁산분면영인적제대혈,경산부본인급가속동의.무균조건하취정상족월부궁산태인적제대혈,경간소항응,용림파세포분리액분리제혈단개핵세포.16빈제혈매빈분위3조,분별이간충질간세포접충밀도1×107L-1、1×109 L-1、1×1011 L-1접충우미포피6공배양판내,가입5%태우혈청적DMEM-LG배양.20빈제혈매빈분위3조,이1×1011L-1단개핵세포밀도분별가입5%、10%화20%태우혈청적DMEM-LG접충우태우혈청포피적6공배양판내배양.채용상규적간충질간세포배양Friedenstein법진행제혈간충질간세포적배양화확증배양.관찰불동제혈단개핵세포적접충밀도、배양액태우혈청농도화태우혈청포피배양명대간충질간세포배양적영향.결과:①태우혈청미포피조이1×107L-1화1×109L-1접충조배양7 d후첩벽수량흔소,첩벽적세포미장만병저즉사망,무법전대.1×1011L-1조첩벽세포교다,간충질양세포여파골양세포병존.1×1011L-1조분5%、10%、20%3충혈청농도,첩벽세포균교다,이간충질간세포위주,태우혈청농도5%조간충질간세포적순도교10%급20%조고,파골양세포상대교소;태우혈청포피조여미포피조상비,첩벽세포소,배양적간충질간세포순도교고,파골양세포상대교소.②류식세포의검측제혈간충질간세포적면역표형,결과현시,제혈P3대간충질간세포불표체혹겁약표체CD34、CD45、CD106등조혈세포표지,은정지고표체CD29、CD44、CD105등간충질세포상관적표면항원표기물.결론:장제혈단개핵세포이1×1011L-1고밀도접충재5%저태우혈청농도적저당DMEM배양기중、태우혈청포피배양병등조건하,가이재체외성공적배양출교순화적제혈간충질간세포,기배양성공솔화간충질간세포순도교고.