CAJ | 학술논문

目的:已经发现随着细胞内胆固醇酯的积聚,脂肪分化相关蛋白的表达明显增加.本文进一步探讨脂肪分化相关蛋白干预细胞内胆固醇代谢的作用位点.方法:Ox-LDL组为80 mg/L氧化低密度脂蛋白与C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,Ox-LDL+antisense组另加1 mmol/L脂肪分化相关蛋白反义寡核苷酸,在不同的时点取样,共观察4 d.使用荧光分光光度计观察细胞内胆固醇酯的改变;使用脂肪分化相关蛋白抗体间标法结合流式细胞术,观察脂肪分化相关蛋白表达量的变化;使用Ox-r[CL-3H]LDL和液体闪烁计数器观察细胞对氧化低密度脂蛋白摄入量的变化,并同时测定乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性.结果:72 h后,Ox-LDL+antisense组细胞内胆固醇酯(19.9±1.9)mg/g protein显著低于Ox-LDL组(46.6±3.4)mg/g protein.4 d观察期间,脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量两组细胞都增加,从12 h时点开始,Ox-LDL组大于Ox-LDL+antisense组,在4 d时点,Ox-LDL组明显高于Ox-LDL+antisense组.两组细胞摄入Ox-r[CL-3H]LDL的量逐渐增加,但是,Ox-LDL+antisense组摄入量从1 d后明显低于Ox-LDL组,在2 d和4 d时点,两组差别仍有显著性.乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性从6h到2 d表现为增加,在2 d时点,两组比较差别显著,Ox-LDL+antisense组的活性明显低于Ox-LDL组.但从2 d到4 d,乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶相对活性稳定.ACAT的活性与脂肪分化相关蛋白蛋白的表达量相关分析表明,Ox-LDL组R2=0.6176(P＜0.05),Ox-LDL+antisense组R2=0.8212(P＜0.05).结论:抑制脂肪分化相关蛋白表达能引起细胞摄入外源性脂蛋白减少和乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶的活性降低,提示脂肪分化相关蛋白与脂滴的代谢功能密切相关,且乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶有可能是其潜在的位点.
목적:이경발현수착세포내담고순지적적취,지방분화상관단백적표체명현증가.본문진일보탐토지방분화상관단백간예세포내담고순대사적작용위점.방법:Ox-LDL조위80 mg/L양화저밀도지단백여C57BL/6J소서복강거서세포공동부육,Ox-LDL+antisense조령가1 mmol/L지방분화상관단백반의과핵감산,재불동적시점취양,공관찰4 d.사용형광분광광도계관찰세포내담고순지적개변;사용지방분화상관단백항체간표법결합류식세포술,관찰지방분화상관단백표체량적변화;사용Ox-r[CL-3H]LDL화액체섬삭계수기관찰세포대양화저밀도지단백섭입량적변화,병동시측정을선보매A:담고순선기전이매적활성.결과:72 h후,Ox-LDL+antisense조세포내담고순지(19.9±1.9)mg/g protein현저저우Ox-LDL조(46.6±3.4)mg/g protein.4 d관찰기간,지방분화상관단백단백적표체량량조세포도증가,종12 h시점개시,Ox-LDL조대우Ox-LDL+antisense조,재4 d시점,Ox-LDL조명현고우Ox-LDL+antisense조.량조세포섭입Ox-r[CL-3H]LDL적량축점증가,단시,Ox-LDL+antisense조섭입량종1 d후명현저우Ox-LDL조,재2 d화4 d시점,량조차별잉유현저성.을선보매A:담고순선기전이매상대활성종6h도2 d표현위증가,재2 d시점,량조비교차별현저,Ox-LDL+antisense조적활성명현저우Ox-LDL조.단종2 d도4 d,을선보매A:담고순선기전이매상대활성은정.ACAT적활성여지방분화상관단백단백적표체량상관분석표명,Ox-LDL조R2=0.6176(P＜0.05),Ox-LDL+antisense조R2=0.8212(P＜0.05).결론:억제지방분화상관단백표체능인기세포섭입외원성지단백감소화을선보매A:담고순선기전이매적활성강저,제시지방분화상관단백여지적적대사공능밀절상관,차을선보매A:담고순선기전이매유가능시기잠재적위점.