生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2006年
2期
127-134
,共8页
曹云鹤%原雪峰%王晓星%郭立华%蔡祝南%韩成贵%李大伟%于嘉林
曹雲鶴%原雪峰%王曉星%郭立華%蔡祝南%韓成貴%李大偉%于嘉林
조운학%원설봉%왕효성%곽립화%채축남%한성귀%리대위%우가림
甜菜黑色焦枯病%侵染性cDNA克隆%外壳蛋白%致病性
甜菜黑色焦枯病%侵染性cDNA剋隆%外殼蛋白%緻病性
첨채흑색초고병%침염성cDNA극륭%외각단백%치병성
利用RT-PCR方法,构建获得了由T7 RNA聚合酶启动子驱动的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全长cDNA克隆pUBF52.摩擦接种苋色藜(Chenopodium amaranticolor)后,体外转录产物可导致与野生病毒相同的枯斑症状,蛋白质印迹和RNA印迹检测也都证明了转录产物的侵染活性.构建了BBSVp24基因的原核表达载体pECP1,转化大肠杆菌BL21后的诱导表达产物能够与BBSV的抗血清呈现特异性反应,表明该基因编码产生BBSV的外壳蛋白(CP).以pUBF52为模板,分别构建了BBSVCP基因的移码突变体和不同程度的缺失突变体.侵染性检测表明,CP基因的移码突变对BBSV在苋色藜上所导致的枯斑症状及病毒RNA在寄主体内的积累基本没有影响,但CP基因的大部或完全缺失会使体内病毒RNA的积累水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突变体转录物接种苋色藜后仅能够产生很轻的枯斑症状.将绿色荧光蛋白(GFP)基因和葡糖苷酸酶(GUS)基因分别与BBSV CP基因的5'端融合,构建了表达载体pBGFP和pBGUS.摩擦接种苋色藜叶片后可观察到GFP或GUS基因的表达,为探索利用BBSV作为外源蛋白的表达载体奠定了基础.
利用RT-PCR方法,構建穫得瞭由T7 RNA聚閤酶啟動子驅動的甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)全長cDNA剋隆pUBF52.摩抆接種莧色藜(Chenopodium amaranticolor)後,體外轉錄產物可導緻與野生病毒相同的枯斑癥狀,蛋白質印跡和RNA印跡檢測也都證明瞭轉錄產物的侵染活性.構建瞭BBSVp24基因的原覈錶達載體pECP1,轉化大腸桿菌BL21後的誘導錶達產物能夠與BBSV的抗血清呈現特異性反應,錶明該基因編碼產生BBSV的外殼蛋白(CP).以pUBF52為模闆,分彆構建瞭BBSVCP基因的移碼突變體和不同程度的缺失突變體.侵染性檢測錶明,CP基因的移碼突變對BBSV在莧色藜上所導緻的枯斑癥狀及病毒RNA在寄主體內的積纍基本沒有影響,但CP基因的大部或完全缺失會使體內病毒RNA的積纍水平大大降低,其中CP基因完全缺失的突變體轉錄物接種莧色藜後僅能夠產生很輕的枯斑癥狀.將綠色熒光蛋白(GFP)基因和葡糖苷痠酶(GUS)基因分彆與BBSV CP基因的5'耑融閤,構建瞭錶達載體pBGFP和pBGUS.摩抆接種莧色藜葉片後可觀察到GFP或GUS基因的錶達,為探索利用BBSV作為外源蛋白的錶達載體奠定瞭基礎.
이용RT-PCR방법,구건획득료유T7 RNA취합매계동자구동적첨채흑색초고병독(BBSV)전장cDNA극륭pUBF52.마찰접충현색려(Chenopodium amaranticolor)후,체외전록산물가도치여야생병독상동적고반증상,단백질인적화RNA인적검측야도증명료전록산물적침염활성.구건료BBSVp24기인적원핵표체재체pECP1,전화대장간균BL21후적유도표체산물능구여BBSV적항혈청정현특이성반응,표명해기인편마산생BBSV적외각단백(CP).이pUBF52위모판,분별구건료BBSVCP기인적이마돌변체화불동정도적결실돌변체.침염성검측표명,CP기인적이마돌변대BBSV재현색려상소도치적고반증상급병독RNA재기주체내적적루기본몰유영향,단CP기인적대부혹완전결실회사체내병독RNA적적루수평대대강저,기중CP기인완전결실적돌변체전록물접충현색려후부능구산생흔경적고반증상.장록색형광단백(GFP)기인화포당감산매(GUS)기인분별여BBSV CP기인적5'단융합,구건료표체재체pBGFP화pBGUS.마찰접충현색려협편후가관찰도GFP혹GUS기인적표체,위탐색이용BBSV작위외원단백적표체재체전정료기출.
