CAJ | 학술논문

目的:构建人类cyclinD3正义和反义真核表达质粒,分别转染到淋巴瘤细胞系Raji细胞中,为探讨cyclinD3基因对淋巴瘤细胞生物学行为的影响提供研究基础.方法:以Raji细胞总RNA为模板,通过RT-PCR获取cyclinD3全长cDNA,克隆入pGEM-T载体,再亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构成含cyclin D3的表达质粒pcDNA3-cyclinD3.再运用DNA重组技术将cyclin D3基因反向克隆到pcDNA3.1中,构建成cyclin D3反义表达质粒pcDNA3-ascyclin D3.用脂质体介导的基因转染方法,将cyclin D3正、反义表达质粒和空质粒分别导入Raji细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株,用WesternBlot方法鉴定cyclinD3基因的表达.结果:酶切鉴定和测序分析证实,实验成功构建了cyclin D3正、反义表达质粒.与转染cyclin D3正义表达质粒和空质粒的细胞相比,转染cyclin D3反义表达质粒的Raji细胞中cyclin D3表达水平下降.结论:正、反义cyclin D3在淋巴瘤细胞中的转染和表达,为进一步研究cyclin D3在淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡中的作用奠定了基础.
목적:구건인류cyclinD3정의화반의진핵표체질립,분별전염도림파류세포계Raji세포중,위탐토cyclinD3기인대림파류세포생물학행위적영향제공연구기출.방법:이Raji세포총RNA위모판,통과RT-PCR획취cyclinD3전장cDNA,극륭입pGEM-T재체,재아극륭도진핵표체재체pcDNA3.1중,구성함cyclin D3적표체질립pcDNA3-cyclinD3.재운용DNA중조기술장cyclin D3기인반향극륭도pcDNA3.1중,구건성cyclin D3반의표체질립pcDNA3-ascyclin D3.용지질체개도적기인전염방법,장cyclin D3정、반의표체질립화공질립분별도입Raji세포,경G418사선건립은정전염세포주,용WesternBlot방법감정cyclinD3기인적표체.결과:매절감정화측서분석증실,실험성공구건료cyclin D3정、반의표체질립.여전염cyclin D3정의표체질립화공질립적세포상비,전염cyclin D3반의표체질립적Raji세포중cyclin D3표체수평하강.결론:정、반의cyclin D3재림파류세포중적전염화표체,위진일보연구cyclin D3재림파류세포증식、세포주기화세포조망중적작용전정료기출.